肠道杆菌的鉴定

肠道杆菌是一群寄居于人或动物的肠道内的细菌，多数为非致病菌或条件致病菌，少数为致病菌。其生物学性状相似，但生化反应、抗原  构造有差异，据此可将它们分类、鉴定。

实验目的：

1. 熟悉肠道杆菌未知标本分离和鉴定方法；

2.掌握肥达式反应的原理及结果分析，熟悉其操作过程；

3.了解大肠杆菌  、痢疾杆菌及伤寒杆菌革兰氏染色形态示教片

4.了解肠道杆菌常见的一些生化反应及其在鉴定上意义

实验材料：

1. 大肠杆菌或痢疾杆菌或伤寒杆菌革兰氏染色形态示教片

2.大肠杆菌、痢疾杆菌（或伤寒杆菌）在SS培养基上的培养物（示教）；

3.大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒甲或乙等在双糖铁培养基上的 培养物（示教）；

4.大肠杆菌与痢疾杆菌（或伤寒杆菌）的混合菌液（模拟粪便标本）；

5.痢疾杆菌及伤寒杆菌诊断血清，生理盐水，玻片；

6.诊断用肥达式菌液、肥达式平板、小试管、吸管、无菌滴管、伤寒患者血清（经56℃30分钟灭活）、水浴箱等；

7. 单糖发酵管、蛋白胨水培养基、醋酸铅培养基、葡萄球菌和绿脓杆菌在普通琼脂  平板上的培养物。

实验内容：

1．肥达氏反应

①原理：人体感染伤寒杆菌或副伤寒杆菌后，能产生与这些细菌起特异性反应的抗体，这种抗体及其量可以用已知的抗原来测得。本实验用已知的伤寒杆菌H、0抗原和甲型、乙型副伤寒杆菌的H抗原与可疑病人血清做定量凝集试验，可测定患者血清中相应抗体的含量及其增减情况，以协助伤寒或副伤寒病的诊断。

②方法：

ⅰ）取一有20（5*4）孔的有机反应板2块，连续标号，每行分别标号1~10。

ⅱ）取中试管1支，加入3.9ml生理盐水，再换一支吸管，吸取患者血清0.1ml（经56℃30分钟灭活）放入中试管内，吸打混匀；（此时血清稀释度为1：40）。

ⅲ）吸取1：40的血清2ml，在每列的第一孔中各加入0.5ml。

ⅳ）在中试管余下2ml血清中，再加入2ml生理盐水，混匀（血清稀释度为1：80）。然后吸取此1：80的血清2ml，在每列第2管中各加入0.5ml。

ⅴ）按上述倍比稀释，并依次加入各管，直至每行第9管。