血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其间的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质部分浓缩，散布不均，应充沛混匀宜轻缓，防止气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上激烈振荡。混浊或有沉积的血清标本应先离心或过滤，弄清后再检测。重复冻融会使抗体效价下跌，所以测抗体的血清标本如需保存作屡次检测，宜少量分装冰存。保存血清自收集时就应注意无菌操作，也可参加恰当防腐剂。

可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均平等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固收缩后即可获得。除特殊情况外，在医学查验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可平等使用。血清标本可按常规办法收集，应注意防止溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。