ELISA试剂盒的实验经验

包被原的性质很重要

这关系到做出的抗体可不可以被其识别，所以保存抗原很重要，做重组蛋白时，要在冰浴下缓慢消融。还有有的包被原可能不是蛋白，关于生物素和脂类物质或小分子物质咱们要事前对其改造再加以包被。

1、亲和素生物素：先亲和素先包被载体，参加生物素化的DNA，这种包被办法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。

2、脂类物质：可将其在有机溶剂中溶解后参加ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或凉风吹干，待酒精蒸发后，让脂质天然干固在固相外表。

3、小分子有必要依托和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。

包被液的挑选

因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间的作用，这种物理吸附对错特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质一般含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体外表。具体的实验还要有巩固的理论外也要实践，看一下最终可不可以应用到自己实验当中去。常用的包被液除了方才说到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

加抗体标本(和二抗)

留意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要留意二抗的作业浓度，太低则上色浅。
显色

我们一开始做的时分，要挑选适合的显色体系。留意显色体系酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠。每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，如出现问题也好剖析。