一、原理
细胞在培育瓶长成细密单层后,已基本上饱满,为使细胞能持续生长,一起也将细胞数量扩展,就必须进行传代(再培育)。
传代培育也是一种将细胞种保存下去的办法。一起也是使用培育细胞进行各种实验的必经进程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才干分瓶。
二、材料和试剂
1、细胞:贴壁细胞株
2、试剂:0.25%胰酶、1640培育基(含10%小牛血清)
3、仪器和器材:倒置显微镜,培育箱、培育瓶、吸管、废液缸等
三、操作过程
1、将长满细胞的培育瓶中本来的培育液弃去。
2、参加0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下调查细胞。跟着时刻的推移,原贴壁的细胞逐步趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,参加10ml培育液停止消化。
调查消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并呈现细针孔空地时停止消化。一般室温消化时刻约为1—3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培育液塞好橡皮塞,置37℃下持续培育。第二天调查贴壁生长情况。
附:消化液制造办法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1:250),参加100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,滤器过滤除菌,4℃保存,用前可在37℃下回温。
胰酶溶液中也可参加EDTA,使终究浓度达0.02%。