ELISA试剂盒试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的运用,但操作中的各个环节对试验的查看效果影响较大,如不留心,有或许致使显色不全、花板等效果。我将操作中各个环节常出现问题的要素及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启示,前进试验质量。下面剖析ELISA试验的要素,并给出相应的解决办法。
一、 孵育
或许要素:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底; 2) 孵育时间人为延伸,致使非特异性结合紧附于反响孔周围,难以清洗彻底。
解决办法:
1) 贴封片或加盖; 2) 按说明进程严峻操控操作时间。
二、洗板
或许要素:
a 选用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
b 选用半自动洗板机洗板时,洗液量缺少,致使洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不彻底;洗板不畅,致使洗板效果差。
c 反响板过多构成洗板等候时间长。
解决办法:
a 确保洗液注满各孔,洗板针畅通,ELISA试剂盒洗完板后在吸水纸(选择洁净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
b 合理安排,或多用几台洗板机。
三、选择试剂
选择质量的查看试剂,严峻依照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
四、加样
或许要素:
a血清或血浆标本别离欠好即进行加样;
b手工操作中,加样板过多构成加样后放入孵箱前等候时间过长(特别是室内温度较高时);
c加完标本再加酶试剂时酶溅起孔外。
解决办法:
a 标本为血清:将血液先天然寄存1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:有必要运用含抗凝剂的血液标本搜集管,采血后有必要当即倒置采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内查看,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,ELISA试剂盒则置于-20℃的低温冰箱内。
b 加样后及时放入孵箱。
c加酶试剂后用吸水纸在酶标板外表轻拭吸干。
d 假设选用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
e 标本较多时,请分批操作。