使用目的：

本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆及相关液体样本中Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)水平。用纯化的绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Ⅱ型胶原(ColⅡ)，再与 HRP标记的Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在   HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)呈正相关。用酶标仪在 450nm  波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)浓度。

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动。

10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。