毛细管电泳仪是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分离科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分离科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分离成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分离有了新的转机。
一、分离条件的选择内容:
1、毛细管类型:是涂层还是非涂层。
2、毛细管长度:是长毛细管还是短毛细管。
3、缓冲液体系:种类和pH值。
4、添加剂类型:甲醇、环糊精和乙腈。
5、检测器类型:紫外检测器、二极管阵列检测器和激光诱导荧光检测器。
二、分离条件的选择流程:
1、尽可能多地了解被分离样品的类型、来源、组成和性质。
2、根据样品的可能性质和来源选择分离模式,若无样品信息可先选用CZE电泳。
3、根据样品性质确定检测方法,一般先选用直接紫外吸收。
4、确定样品处理方式,包括衍生方案、离心和过滤等。
5、根据样品解离常数计算zui优pH或利用内径为75μm毛细管和磷酸缓冲体系确定pH范围。
6、根据所需pH构建缓冲液体系,包括进一步优化pH和缓冲试剂浓度等。
7、优化其它操作参数,如毛细管尺寸、分离电压和温度等。
8、确定是否需要使用添加剂和非水溶剂。
9、确定是否需要换用其它分离模式。