液相色谱仪分析中向流动相加入改性剂调节pH值可以抑制溶质离子化和调节离子强度。 一、抑制溶质离子化: 反相液相色谱中,常向含水流动相中加入酸、碱或缓冲溶液,使流动相的pH值控制在一定数值,抑制溶质离子化,减少谱带拖尾,改善峰形,以提高分离选择性。例如在分析有机弱酸时,常向甲醇-水流动相中加入1%甲酸(或乙酸、三氯乙酸、磷酸、硫酸),抑制溶质离子化,以获得对称的色谱峰。对于弱碱性样品向流动相中加入1%三乙胺,也可以达到同样的效果。 二、调节离子强度: 反相液相色谱中,当被分析物质是易离解的有机物时,随流动相pH值的增加,键合相表面残存的硅羟基和碱的阴离子的亲和能力增强,会引起峰形拖尾并干扰分离,可在流动性中加入0.1%~1%的乙酸盐、硫酸盐或硼酸盐。因为盐效应会减弱残存硅羟基的干扰作用,可抑制峰形拖尾并改善分离效果。但经常使用磷酸盐或卤化物,会造成硅烷化固定相的降解。 通常调节pH值对中性化合物的影响不大,但对带有离子化基团的化合物(如氨基、羧基和羟基等)保留因子影响可达10~30倍,分离度变化明显。但如果使用的流动相中加入了缓冲盐,最好在使用前用纯水过渡。如果缓冲盐或离子对试剂浓度较低,需要较长时间平衡。
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