液相色谱仪化学键合固定相的重复性、改性完全程度可通过残余羟基、覆盖度和覆盖均匀性表示,测定和评价的方法有微量元素分析法、色谱法和光谱法等。
一、微量元素分析法:
直接测定键合相的碳含量。
1、表面键合官能团浓度:
C% =(键合相中C的重量/载体的重量)×100%
(1)商品键合相:2%~29%
(2)甲基硅烷键合相:3%~4%
(3)十八烷基硅烷键合相:20%
由于C%随基质比表面积和键合有机基团的分子量的变化而变化,在研究工作中常采用表面键合相浓度α表示,即单位表面积所含键合相的浓度(umol/m2)。
α= W/(M×S)
式中:W为1g载体上键合有机官能团的质量(ug),M为键合有机官能团的摩尔质量(g/mol),S为载体比表面积(m2/g)。
2、表面碳覆盖率:
即硅胶表面含碳的质量百分数。
C% =(12×NC×W/M×106)×100%
式中:12为碳的原子量,NC为键合有机官能团的碳数,W和M含义同上。
3、有机官能团的表面覆盖度:
即在单位表面积上已键合的有机官能团的量(umol)与可反应的硅醇基的量(umol)之比。
二、色谱法:
用非极性键合相填料正相洗脱的方法检查残余羟基的含量,即用庚烷作流动相。若残余羟基很少,则象甲醇和丙酮等极性化合物的保留时间与tM相近,且峰形对称。若残余羟基很多,则情况相反。这种评价方法较为客观。
三、光谱法:
基于Si-OH基在3750cmˉ1处有特征的红外吸收谱带,获得某些信息。