5.3 系统延迟体积
设备与试剂同5.2.1。
测试方法参照5.2.2，先以100%流动相A，0.2 mL/min平衡系统,基线稳定后，按照表5设置梯度程序，启动程序采集检测器信号，记录谱图并保存。然后在谱图上读取基线上扬拐点(50%响应信号处)对应的时间t(min)，按照公式(5-3)计算梯度系统延迟体积。
表5 系统延迟体积梯度设置表
5.4 密封性
参照4.1.3，测试点为压力上限90%，测试位置：(1)进样阀后，色谱柱前；(2)色谱柱后，检测池前。观察恒流泵压力降，滤纸检测是否有泄漏。
5.5 重复性
5.5.1 设备与试剂
色谱工作站一套,带 20uL 样品环(对于 UHPLC，选择 1uL 样品环)的手动进样阀一个(配自动进样器则不需要)，合适规格的注射器一支(配自动进样器则不需要)，C18 色谱柱一支(理论塔板数不低于 18000)或阻尼管；试样参见表 6;流动相为 85%甲醇水溶液(样品色谱峰保留因子 k 值不低于 3)或纯水。
5.5.2 测试方法
仪器整机系统(包括恒流泵、检测器、色谱柱、进样系统、色谱工作站等)连接好，按照仪器系统配置的检测器类型选择流动相等测试条件和参数，见表3和表6。 以85%甲醇水溶液为流动相，流量为1.0 mL/min，基线稳定后注入20 L相应的试样，记录保留时间和峰面积，连续7次。
注：对于UHPLC，色谱柱选择亚2um，2.1×50mm，流量设为0.2 mL/min，进样量为1uL。
分别将保留时间、峰面积测试数据代入式(5-4)计算定性、定量重复性RSD值。
.................. (5-4)
式中：
RSD—定性、定量重复性相对标准偏差；
Xi—第i 次测得的保留时间或峰面积；
—n 次测量结果的算术平均值；
i—测量序号；
n—测量次数(n＝7)。
5.6 检出限与定量限
设备与试剂同5.5.1，试样按照表6选择。
测试方法参照5.5.2，基线稳定后注入相应的试样，采集谱图，记录色谱图中试样的峰高和基线噪声，重复三次取平均值。然后按式(5-5)、(5-6)计算，作为仪器的检出限(S/N=3)与定量限(S/N=10)。
式中：
cLOD—检出限，mg/mL(以最小检出浓度计)； cLOQ—定量限，mg/mL(以最小定量浓度计)；
Ni—动态基线噪声，AU（或V）；
c—样品浓度，mg/mL； H—样品峰高，AU（或V）；
V—进样体积，μL；
注：式中的数字“20”为标准的进样体积，μL。
5.7 线性范围
设备与试剂同5.5.1，试样按照表6选择。
测试方法参照5.5.2，基线稳定后，由低到高，依次注入10个不同浓度相应的试样，采集谱图，每个浓度重复测试三次，取算术平均值。以前五个浓度点和对应峰面积作标准曲线，计算出后五点的理论峰面积，与对应含量的峰面积比较，峰面积刚好大于计算值5%时，认为曲线弯曲，此点浓度作为线性上限CH。 以5.6测得的检测限作为线性下限CL。最后，由CH/CL算出检测器线性范围。
表6 配置不同检测器时试样的选择
注：仍未达到线性拐点，则需加大或减小试样浓度后继续进行测。
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