一、仪器与试剂
1.1仪器
高效液相色谱仪,配紫外检测器。
1.2色谱条件
柱:c18,5 um,150 mmX4.6mm
流动相: 甲醇:0.067mol/L乙酸溶液40:60
流速:1.0ml/min
柱温:35℃
检测波长=286 nm
进样量:10出ul
1.3试剂
甲醇(HPLC),
三氯甲烷(A11)。
0.067mol/L醋酸溶液:4.0g醋酸,用蒸馏水固定体积为1000 ml。
咖啡因标准品:准确称取0.10009咖啡因(纯度>99.8%),用重蒸水定容1000毫升。溶液为1.0 mg/ml。
二、实验方法
2.1样品处理
以0.25≤1.0g样品加入2~3ml蒸馏水,加入10.0ml比色管,与10.0ml三氯甲烷准确混合,隔夜超声提取30 min(或离心15 min),经0.45μm滤膜进行液相色谱分析。
2.2标准曲线、相关系数及检出限
咖啡因标准浓度系列分别为0.00、10.00、25.00、50.000、100.00、200.00和400.00ug/ml。在286nm处测定10ul的峰面积,绘制峰面积咖啡因浓度标准曲线,r=09998。检测限为2.0ug/ml(按仪器噪声响应值的3倍计算)。
三、结果和讨论
3.1流动相的选择
当GB/T5009.139.2003给出的移动相位用于确定时,出现标准峰的头分叉,这影响了确定结果。该方法给出的移动相峰值时间快,标准峰类型好。
3.2咖啡因在46毫升水中、75毫升乙醇、6毫升三氯甲烷和600毫升乙醚中的溶解度为1克,茶多酚的溶解度可溶于乙醇和乙酸乙酯中,不溶于三氯甲烷。根据不同的溶解度,茶多酚中的咖啡因可以得到很好的提取。