灵芝子实体中主要含有三萜类多糖及蛋白质等活性成分灵芝也含有真菌类的特征成分麦角甾醇本文采用紫外分光光度法和高效液相色谱仪分别测定这4类活性成分。
1、仪器与试剂
高效液相色谱仪配紫外检测器；
紫外可见分光光度计；
电恒温水浴锅；
电子分析天平：0.1mg；
超声波清洗机；
高速离心机；
D-葡萄糖熊果酸、牛血清蛋白参比物质、麦角甾醇参比物质；
苯酚蛋白定量试剂盒5%香草醛冰醋酸,苯酚,无水乙醇,丙酮,浓硫酸分析纯,乙腈色谱纯。
样品测试，采集或购买不同品种的灵芝样品。
2、总多糖含量测定
2. 1 供试品溶液的制备 称取灵芝子实体干燥粗粉 1 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入 80％ 的无水乙醇 100 mL，85 ℃ 回流提取 2 次，每次 0. 5 h，过滤弃去滤液，加蒸馏水 100 mL，100 ℃ 回流提取 2次，每次 1 h，过滤，合并滤液，定容至 250 mL 量瓶中，摇匀，即得。
2. 2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的 D-无水葡糖糖对照品 10. 0 mg 于 100 mL 量瓶中，加蒸馏水配制成 0.10 g.L-1参比溶液放入冰箱备用。
2. 3 标准曲线的绘制
精密吸取葡萄糖对照品溶液 0. 3，0. 6，0. 9，1. 2，1. 5，1. 8 mL 分别置于具塞试管中，加蒸馏水至 2. 0 mL，摇匀后置冰浴中加入5％ 的苯酚溶液 1 mL、浓硫酸溶液 5 mL，摇匀，静置5 min，于沸水浴中加热 15 min，冷却至室温，以蒸馏水 2. 0 mL 为空白，同法操作，于 490 nm 波长处测定其吸光度以质量浓度（C）为横坐标，A 为纵坐标绘制标准曲线。
2. 8 样品含量测定
分别取样品，按 2. 1. 1制备供试品溶液，平行 3 份。精密吸取 2 mL 至试管中，按 2. 1. 3 测定其吸光度。
3、总三萜含量测定
3. 1 供试品溶液的制备
灵芝子实体干燥粗粉1g精密称重圆底瓶，加入无水乙醇50 mL浸泡1h，回流2h，冷却2h，以补充差异重量，过滤，取滤液，得到。
3. 2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的熊果酸对照品 10. 0 mg 置 50mL量瓶内，加无水乙醇配制成 0.2 g.L-1参比溶液，放入冰箱备用。
3. 3 标准曲线的绘制
精密吸取熊果酸对照品溶液 0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0，1. 2 mL 分别至试管中，100 ℃ 水浴蒸干后加入 5％ 的香草醛-冰醋酸溶液0. 5 mL，摇匀，加入高氯酸溶液 0. 8 mL，60 ℃ 水浴20 min，取出后于冰浴中加入冰乙酸 5 mL，摇匀，室温放置 15 min。以无熊果酸对照品溶液的试管为空白，同法操作，于 548 nm 条件下测定吸光度，以熊果酸质量（X） 为横坐标，吸光度（Y） 为纵坐标绘制 标 准 曲 线。
3. 4 样品含量测定
分别取样品，制备3份供试品溶液。精密吸收0.5ml于试管中测定结果。
4、 蛋白质含量测定
4. 1 供试品溶液的制备
灵芝孢子粉重1g，称重，塞入锥形瓶中，加入100 mL蒸馏水，超声提取10 min，取适量滤液，8 000 r·min-1离心15 min，收集上清液。
4. 2 对照品溶液的制备
牛血清白蛋白参考物质在5毫克时称重，质量浓度为0。25gL-1牛血清蛋白参比溶液，置于冰箱中。
4. 3 标准曲线的绘制
精密吸取对照品溶液0. 1，0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0 mL 于试管中，加蒸馏水至 1 mL，摇匀。分别在试管中加入试剂盒中的试剂甲 5 mL，摇匀，于室温放置 10 min;加入试剂乙 0. 5mL，立即摇匀，于室温保温 30 min 后于 750 nm 波长处测定其吸光度。以1毫升蒸馏水为空白，采用相同的方法以蛋白质浓度为横向坐标，C吸光度为纵向坐标A绘制标准曲线。
4. 4 样品含量测定
分别取样，并平行制备三份样品溶液。精密度吸收进试管1.0 mL，测定其吸光度值，计算结果。
5、麦角甾醇含量测定
灵芝子实体中麦角甾醇含量测定采用高效液相色谱仪，色谱柱为C18 （4. 6mm × 250mm，5 μm），流动相 100％ 甲醇，流速 0.8ml.min-1，检测波长282nm。
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