高效液相色谱仪梯度洗脱系统也称为梯度洗脱或程序洗脱。在相同的分析周期中，流动相的浓度比按一定的步骤不断变化，称为梯度洗脱。原理：流动相由几种不同极性的溶剂组成。通过改变流动相中溶剂的比例和改变流动相的极性，每个组分都有一个合适的容量系数k，样品中的所有组分都能在最短的时间内达到最佳的分离特性：提高柱效率和提高分离效率。检测灵敏度。敏感。当样品中某一峰的k‘值比上一峰高出几十至数百倍时，梯度洗脱效果特别好。在梯度洗脱过程中，必须采用恒流泵来保证流速的稳定性，否则很难得到重复的结果。高效液相色谱仪的梯度洗脱通常用作弱极性溶剂A和强极性溶剂B。二元梯度高效液相色谱系统二元梯度高效液相色谱系统是一个带有两个并联泵的高压系统。它可以同时具有两个移动相。可按预设比例进入，高压混合。混合比更准确，不易产生气泡，不需要重复来改变流动相。清洁提高了工作效率。
二元和四元梯度高效液相色谱仪系统是一个低压系统，不是四个泵，而是一个单泵和一个在泵前面的比例阀。流动相的输入由比例阀控制。最多四个移动相可以同时进入流动路径，并根据预定的比例进行混合。由于在大气压下混合，容易产生气泡，因此必须配备在线偏转器。它可以消除气泡的影响。
二元泵和四元泵各自的特点：
二元泵：
1.两台输液泵可独立控制，独立使用。
2.在低速小于0.2ml/min的条件下，速度精度和混合精度都很好。
四元数泵：
1.灵活移动相比，随机切换。
2.结果表明，该泵运行简单，故障率低，维护成本低。
二元高压高效液相色谱仪肯定优于四元低压高效液相色谱仪。通过改变泵的流量，得到二元高压的混合比通常，泵的速度非常精确，所以混合精度也很高。四元件低压梯度的混合比例是通过控制不同流道电磁阀的启闭时间来控制的。混合比例理论上也是准确的，但实际上，电磁阀的开启和关闭会有一个延迟，不管它移动的有多快，总是需要一点时间。
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