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DNA提取磁珠特性的全面讲解

2020.2.01
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

一、悬浮时间

悬浮时间的长短对加样均一性有较大影响,悬浮时间越长的DNA提取磁珠,加样均一性越好。GNT系列的磁珠缓冲液,悬浮时间能稳定在5-10min或30-40min。(测试方法:1ml磁珠溶液,沉降至500ul所用的时间)

  


二、磁吸时间

磁吸时间对实验操作效率有较大影响,磁吸越快的磁珠,操作体验越好,效率越高。磁吸时间在20-30s以内,有些可以达到瞬间磁吸的效果。(测试方法:将10ul磁珠溶液置于1ml纯水中,完全磁吸的时间)


三、吸附效率

吸附效率是用户关心的参数,任何核酸提取实验,得率越高越好,吉恩特生物通过不断的优化与验证,将DNA提取磁珠的吸附效率做到稳定。诚然,在磁珠法核酸提取的过程中,磁珠需要搭配若干种试剂共同完成提取工作,这其中会有较多的不稳定因素,影响磁珠真实的吸附效率。因此,我们建议用回收效率来反应DNA提取磁珠真实的吸附效率。在这套体系中,有固定浓度的样本,固定浓度的结合液,变量就是不同批次的磁珠,用这套体系得出的磁珠吸附效率,更加客观,参考价值也更高。

▲使用不同批次的磁珠,对已知浓度的DNA进行回收,回收效率一致(80%左右),证明磁珠的批次稳定性良好

四、磁珠热稳定性

DNA提取磁珠热稳定性是经常被使用者忽略的参数之一,这里的热稳定性是指将磁珠置于洗脱液并加热一段时间,磁吸完全后,对上清液进行紫外分光光度计的分析。此时,热稳定性较差的磁珠,会在260nm处有吸光值,若是有这样的情况出现,理论上来讲,这样的磁珠是完全不能使用的,因为大部分的核酸提取实验,都需要加热步骤,而由于加热引起的磁珠本身的数据波动,会使实验结果很不稳定,对使用者造成困扰。通常情况下,如若某些实验数据高的离谱,就要考虑磁珠本身的热稳定性是否存在影响。

▲将20ul磁珠置于50ul洗脱液中,70℃水浴30min后,进行上清浓度检测,检测结果良好

五、磁珠重悬性

磁珠重悬性也经常被使用者忽略,重悬性是指DNA提取磁珠自然沉降后,再次回到悬浮状态的难易程度。有些磁珠自然沉降后,容易结块,且结块较难被打散,使用过程中容易造成加样的不均一,尽管这种现象可以通过涡旋震荡进行改善,但重悬性差较差的磁珠,增加了使用者的操作难度,所以选择一款重悬性好的磁珠,才是解决该问题的根本办法。

▲磁珠重悬性

六、磁珠储存条件和保质期

储存条件和保质期也是用户经常关心的问题,由于储存不当或产品存放时间过长引起的问题,也令人头疼,较难追溯。GNT系列的磁珠通过严格的验证,可实现全年室温保存(洛阳地区全年室温在2-32℃之间),且理化性质均保持稳定。

▲将磁珠置于室温(2-32℃,无需控温)保存不同时间,回收效率不变(80%左右)

七、磁珠灭菌后的验证

磁珠能否进行灭菌,也是客户经常提起的问题。我们对吉恩特生物的DNA提取磁珠,进行121℃灭菌30min的处理,并作相关验证实验,结果显示除了磁珠浓度会略微增加外(水分蒸发),吸附效率、纯度、悬浮时间等参数并未发生变化,保持稳定。

▲对比磁珠灭菌前后的相关实验数据,除浓度略微增加外,其余参数均能保持稳定性

八、磁珠用于核酸提取的验证

说了这么多,使用DNA提取磁珠的终目的是要搭配试剂进行高质量的核酸提取,GNT系列的磁珠配合相关试剂,可以实现各类样本的核酸提取。(PS:GNT-B02血液基因组DNA提取试剂盒现免费试用,全程常温操作,无需任何加热步骤,而且再也不用担心A260/A230比值偏低啦)

▲使用不同批次的磁珠,对200ul血液样本进行基因组DNA提取,得率和纯度均在标准范围内


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