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高效杂交瘤细胞融合和单克隆化

2020.2.05
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

单克隆抗体自问世以来,以其特有的高度专一性迅速占领医学的多个领域,在蛋白亲和纯化、医学诊断、肿瘤导向治疗以及放射性免疫成像技术方面发挥着重要的作用,因此单克隆抗体的制备技术之一——杂交瘤技术也越来越重要。

杂交瘤技术是指将骨髓瘤细胞和免疫淋巴细胞融合,形成能分泌高度纯一单克隆抗体的杂交瘤细胞的技术。可以简单的概括为三个步骤:(1)细胞的选择和融合(2)应用选择培养基(HAT)筛选杂交瘤细胞(3)有限稀释杂交瘤细胞克隆化,最终获得能大量分泌高度纯一单克隆抗体的杂交瘤细胞

过程看似简单,实则困难重重,费事费力费感情~辛辛苦苦的几个月动物免疫可能付诸东流,好不容易检测到的阳性克隆可能越来越弱,相信中枪的肯定不止这一些

  1. 细胞融合率不高

  2. 细胞融合后生长状态很差,时不时地飘起来,还没2周细胞已全军覆没

  3. 单株化实验不理想,能获得的细胞克隆数量少

  4. 阳性率低

……
如果你有遇到以上问题,不防试试这款产品——HybriMore杂交瘤促进生长剂,尽最大可能保住若干个月辛苦免疫的成果--来之不易的抗体分泌细胞

特点:

部分实验数据

a. 增加单株化融合瘤细胞存活率

HbriMore杂交瘤促进生长剂可以大幅提升融合后杂交瘤数目,添加HbriMore培养杂交瘤细胞,平均一盘96孔可以实现1000-1500个NS/1融合细胞存活,相比一般培养液可以增加10倍以上细胞数目

b. 提高单株化成功率

使用HbriMore杂交瘤促进生长剂进行单株化,每一盘约有90-96个细胞存活,单株化成功率接近100%,而一般牛血清培养液或Feeder Layer存活率分别为10-40%和50-80%

c. 不会降低抗体生产量

HbriMore杂交瘤促进生长剂不会对其分泌抗体量产生影响且HbriMore为非动物性来源的纯化学配方,不会对杂交瘤细胞产生负面影响

风险提醒:此款产品并非对所有客户的实验流程均适用,以上数据仅供参考,具体的用量和效果需实际使用过程仔细观察和进行数据对比。目前使用效果明显的客户回购率极高。

最后给大家分享个小编的经历

关于杂交瘤的以上问题小编读书的时候全部中枪。00年代的实验室流行克隆新基因,被老板分配了一个NCBI上同源家族文献少于3篇的基因,在CRO服务不发达的年代,未在几家抗体公司货架上的基因,只能硬着头皮自行制备抗体。小编志向满满地撸起袖子开始纯化蛋白,免疫兔子和小鼠,关键的那几天恨不得搬着行军床上实验楼天台简易动物房和动物们陪吃陪住,小鼠在某学霸师姐的帮助下成功融合并检测到效价不错的抗体分泌克隆若干个,无奈随着一轮轮的单克隆化过程,阳性数目越来越少,抗体表达量越来越低,以至于后期扩增后不敢再进行一轮单克隆化而选择冻存保种。好在兔子免疫效果也不错,最后在某学霸师兄的帮助下成功获取兔子全血和血清。可喜的是,在折腾半年之后多抗制备成功。可恼的是随后的半年时间小编花了3个月验证了合格的可以避开同源基因的的siRNA序列,又花了3个月在这批siRNA的协助下验证了多抗的特异性和灵敏度。至于那批未再单克隆化的抗体分泌细胞,十几年过去了,还静静地躺在液氮罐。。。。。。


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