一、问：这段时间一直在做生物碱，流动相选择的是乙睛：0.02mol/l磷酸二氢钾（26：74），现在实验做完了，最后冲柱子。先长时间乙睛：水冲柱，再用甲醇：水冲柱，最后用甲醇冲柱。柱压一直很高，请问各位，是否不该这样冲柱？该怎样解决？
Jimmy_ok：乙睛和甲醇没有多大区别的，只是乙睛黏度小，对于柱子保护有利，当然价格也高些，个人感觉完全可以用甲醇替代冲柱（当然实验室有钱就另说了）。从你的流动相上看，水性比例较大，且使用缓冲盐。所以冲柱子建议先5%甲醇1小时，然后50%甲醇，80%，100%甲醇各0.5小时，第二次开机时先用5%甲醇冲20分钟后再换流动相。柱压过高时可以采用低流速，长时间来冲。顺便提一句，流动相和样品都要严格过滤的！
adashuishui：
我的建议：
1、如果你做最后一个样品的时候柱压还是正常的，那么可能就是冲柱出现了毛病。由于你的流动相采用了较大比例的缓冲盐，因而冲柱的时候要采用含水相较多的溶液低速冲洗，如果有机相的比例过高，磷酸二氢钾有可能结晶析出导致柱压升高。
2、如果你做最后一个样品的时候柱压已经很高，那就是样品造成的。此时色谱柱的柱头已经遭到污染，因而需要清理。方法有：A、用流动相低速反冲；B、打开柱头，将污染物刮去（只有很薄的一层，大约3mm)，然后用相同类型的已经废弃的色谱柱的出口端的填料将柱头填平（以少量甲醇调成膏状）。
3、小心不要随便用别人用过的冲柱液，因为长时间放置的液体有可能进入粉尘，也有可能长菌。因而一定要保证其是干净的，没有颗粒存在（要过滤后使用）。
pantherww：
1、我想你应该注意一下你的甲醇是不是HPLC级的，不是的话就应该先过滤在使用。
2、你可以不用乙睛，毕竟成本太贵，而且效果和甲醇差不多，先用100%的甲醇冲洗20分钟，再用甲醇：水（50：50），冲洗30分钟即可。
3、如果柱压还是太高，可以用甲醇：水（50：50）反冲柱子1小时，再正冲30分钟。
4、注意是否是预柱堵了。
5、HPLC仪器有它自己的一个滤器，可以考虑更换里面的滤芯。
zslnutcm：由于流动相中有磷酸盐，所以实验结束时先用乙睛冲柱，有机溶剂会造成无机的磷酸盐析出，堵住了管路。建议先用温的纯水冲洗管路，看看能不能使压力降下来，再把泵的滤头拆下来，用甲醇超声清洗一下，或者干脆换个滤膜，应该会对你遇到的问题有帮助。
toyosa：一般柱压过高是最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1、如果你有保护柱的话，拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；
2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查。
3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，(此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动性)。这时，如果柱压仍不下降，再检查；
4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与柱子的厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。
ameng：我的个人意见：
1、乙腈-水（10：90），0.5的流速，300psi的压力我觉得很正常啊，本人平时水100%冲洗时压力一般为800多psi（流速1），50%乙腈/水压力差别不大，在0.5的流速下面压力通常要比1ml时压力的一半还要小。因此个人认为300的压力正常。
2、如果怀疑有异，首先检查流速正常否，在出口接上一个10ml量筒，运行20min看流出体积。
3、如果流速正常应该没问题。
4、如果流速不正常则要怀疑是否泵的问题，如果是双泵运行，建议你换用单泵100%运行，分开测流速，找出不正常的泵。
5、流速不够多半就是单向阀失灵，拆下来超声清洗即可，实在不行换新的，waters的单向阀2500元/对。
6、重新看上面所述出峰变晚那估计应该是流速不够了。
7、另外还有一个问题，如果你是直接乙腈和水分开双泵混合运行，那么就要考虑是因为乙腈和水混合产生气泡导致压力下降，建议先行混合脱气后单泵运行。
三、问：有一个样品只能用四氢呋喃溶解（用纯甲醇则成混浊液），而我的流动相是甲醇比乙腈＝90：10，柱子是hp的c8柱，柱长15cm，进样后发现柱压上升很高，然后用纯甲醇冲柱子，在流速为0.5/min的情况下，达到了110，而平时只有60，现在该怎么办？我的柱子是不是不行了？我尝试过反冲也没什么效果啊，很急，希望各位专家给个答复，谢谢！！！
星语心愿：1.请不要再用甲醇冲洗柱子了，那样你的柱子会堵塞，破坏会更大。你的样品在纯甲醇成混浊液，那用90%甲醇做流动相，肯定堵呀！
2.你可不要反冲呀！你的柱子会降低使用寿命的。
3.请问你的样品在水、乙腈中的溶解度怎么样，如果溶解度好的话请用乙腈冲洗，或用水和乙腈混和液冲洗。
4.只能选择本产品易容的溶液冲洗，实在不行，用四氢呋喃冲洗吧，流速小一点（0.5ml/min）。冲完后用30%甲醇溶液冲洗，再用甲醇冲洗，以活化柱子。
一草亭：柱压高我一般这样做：
1.按管路的反方向从后往前，采用一一坼卸的办法依次检查各个接口，特别是混样器处的前后接口，特别注意各道接口处的滤膜，拿下来超声（甲醇/水），一般经过全面的检查柱压就会降低很多。
2.泵前后的接口比较复杂，更要一一检查，这地方经常容易出现不畅通的现象，解决办法还是超声。
3.如果用过缓冲盐，很可能要考虑缓冲盐的析出，如果析出在泵前后的接口处，那就太好办了——超声，如果析出在柱子里，那就麻烦了，反复用甲醇和水慢速冲吧，不行也可以考虑异丙醇。
四、有关柱压和保留的疑问
cidyling：关于柱压升高的解决方法，我有以下几点心得：
1、如果用了盐类流动相，在使用完毕后清洗柱子时要先用水置换出泵和柱子中的含盐流动相，然后用不同配比的甲醇或乙腈洗涤柱子，比如：5%、10%、20%、30%、90%。
2、如果所检测的药物是不溶于水、乙腈、甲醇的，就要考虑是否会在洗柱子时不会冲出去，那样就很容易堵塞柱子，那样就需要加入一些可溶药物的酸类或其他类在冲洗液中。
3、盐类对泵的损伤也是很严重的，所以一定要先用水冲洗干净泵。
4、柱子用了一段时间以后需要把筛板拆下超干净，柱压也可降下不少。
5、柱子也是有疲劳限度的，如果你一直用他而不让他休息，他肯定会和你闹意见的，所以还是那句老话，冲柱子要耐心，要爱护他才能使他更长寿更好用更听话。
xiangfree：我再给你的建议：
1、每次做完试验要冲柱，我个人经验先20%醇，再80%水（我试过先5%，再50%，再纯甲醇冲，等各种比例冲洗，但最后发现我说的那个比例冲洗效果是最好的）这是一般做法。
2、如果有特殊原因（如用了离子对试剂等）可长时间小流速冲洗，如果是老柱子，那有可能就是堵了，你可以试着小流速反向冲洗，注意流速一定要小不然柱子可能会坏的。
3、另外，向你说的可能是筛板堵了，那你就要拆下来，用某些溶剂（稀硝酸、稀硫酸、洗液等）超干净，再使用。
4、还不行，那只有拆柱子，挖掉柱头的填料（2mm左右），在重新装一些（装时要多出来些，最好有小鼓包，这样才能装紧）再使用，一般都行，我个人搞过几个老柱子，柱效蛮高的。
不过这只是我个人经验，可能不适合你呀！
五、问：我用C18反相柱、甲醇：磷酸二氢钠（0.01mol/L，pH7.0）（60：40）、1ml/min分离一个生物碱（长春新碱，弱碱）的硫酸盐，在走完流动相后没有用水过渡，直接用甲醇冲洗，怀疑是磷酸盐析出，柱压渐升高至40多MPa，后又用水冲洗，柱压降至29MPa左右，后又用甲醇、乙腈冲洗，在0.5ml/min条件下柱压即达20MPa左右，请问，柱子是磷酸盐析出还是有否可能生物碱析出？接下来如何处理？冲洗到柱压多少就基本完成？
apple342：既然水冲有效，就继续用水冲吧，柱压应与你上流动相前用同流速同温度水冲时的压力差不多，如果你做了记录的话，不然，你就只好多冲几个钟头，建议用90%的水，10%的甲醇。如果着急还可以把水稍加热，使盐溶得更快更干净。用水冲时，如果压力下来了，最好把流速打到1.2ml/min冲一下，把泵头上的盐洗掉。
xwcheng：你的柱子应该是磷酸盐的析出导致柱压过高！
再生方法：
1. 用95%水（切记C18柱不可用100%水冲洗，因为C18烷基在有机相中自然张开如手掌状，如果用100%水冲会导致不可恢复性的收缩）反冲！！！注意流速要减小！（比正冲小上一般）！
2. 将柱子放在水浴锅（没有柱温相的情况下），温度根据柱子的承受温度控制（说明书有柱子的温度范围），用THF冲！
3. 最后用95%乙腈5%水冲，完了保存在100%乙腈中，此时压力会正常（视你的柱子的直径、长度、粒径有所不同）！
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