打孔液有很多种，方法也有很多。与你的实验方法相关。我用过酒精固定或Triton X-100（我做的都是培养的细胞）：
（1）70%的酒精固定24小时即可，不再需要再打孔。如在PI染色测细胞周期或凋亡。
（2）Triton X-100是比较强烈的穿孔剂。0.1% Triton X-100/PBS（再加0.1%BSA） 是比较温和一点。浓度可适当提高。作用时间以几分钟为宜。这个时间必须要自己试。时间长了细胞易破裂，短了则打孔不够。如果你要染胞浆，则时间适当短些，如果要染内质网或核内等，由于要对两层膜性结构打孔，时间当然会长一些。
（3）可以试试0.1% saponin（皂素）。
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