流式细胞仪是现代细胞生物学家和免疫学家不可缺少的优秀工具。它可以提供广泛的信息，帮助研究人员识别各种细胞的物理和化学特征。作为一种用途极为广泛的仪器，流式细胞仪有许多应用，包括细胞计数、分选、活力、细胞凋亡检测、膜电位甚至结合检测等。但是其无法直接检测分子间结合动力学，因此本文我们讨论了流式细胞仪的应用并演示如何使用我们的OpenSPR的LSPR技术对流式细胞仪的工作做革新，以更快的获得发表文章所需的动力学数据。
流式细胞仪的工作原理
流式细胞仪是基于光学的仪器，通过流体系统、激光器、一系列光学滤波器和检测器进行运作。将荧光标记的细胞悬浮液注射入仪器，细胞通过一个漏斗型流体瓶颈，将细胞变成单细胞流。然后，细胞通过激光照射的细胞检测区，基于细胞内的物理和/或化学特征，光被散射，细胞上的荧光团也被激发并向探测器发射，从而获取细胞的荧光信号和光散射信号。细胞被激光检测，它们要么直接被废弃，要么被分类并进入收集管进行下游检测。
从流式细胞仪可以得到的信息
流式细胞仪可以进行一系列的定量测量，包括细胞计数、分类、活力测定、凋亡检测、膜电位和表面亲和力检测。重要的是，生物治疗药物已经成为治疗癌症、免疫紊乱疾病等的主要研究领域。值得注意的是，靶向免疫细胞表面受体的候选生物疗法具有独特的结合特性，这是一个非常重要的需要量化的参数。有趣的是，一些非常常见的检测可以用流式细胞仪进行，其可以从生物治疗受体结合反应中确定明显的亲和性。
受体占用率（RO）分析
受体占用实验是一种高通量的方法，通过这种方法可以测量候选治疗(或生物疗法)之间的结合亲和力。值得注意的是，RO分析包括两个重要的“sub-assays”。第一个sub-assays ，荧光标记的非竞争性抗体结合的细胞被注入流式细胞仪并收集数据。随后，将偶联细胞和目标抗体注射到仪器中，生成标准曲线后，可以定量测定表面受体的总表达量。
第二个sub-assays，细胞应与未标记的靶抗体结合，但某些靶抗体应单独标记。注入未标记目标抗体结合的细胞，并记录数据。随后，注射标记的目标抗体，此时，只有自由受体会结合标记的抗体。使用标准曲线，可以确定自由受体的数量。
值得注意的是，将这两种sub-assays结合起来时，就有可能计算出一个称为受体占用率的值。随后，该值可以转化为表面亲和值，如果这个实验长时间进行，则可以计算出间接的动力学值。
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