分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

如何选择符合您需求的HPLC或UHPLC色谱柱?(三)

2020.4.13
头像

王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

3.ACE Excel为UHPLC带来了享有盛誉的ACE HPLC性能

重要的是要认识到色谱柱的选择性和柱效是独立的变量,在开发分离方法时您不必选择使用一种而不使用另一种。事实上,为了实现最佳的总体分离效果,您应当对上述两个变量以及保留值进行优化。当需要实现高速分离时尤其如此。(参见图7)

图 7:利用柱效和键合相选择性来开发更快的分离方法


条件:
流动相:

A = 5mM甲酸(0.189)ml / L;

A = 5mM甲酸(溶于甲醇中)

柱温:40℃

检测:PDA, 254nm

样品:

  1. 阿司匹林

2. 非那西丁

3. 1,3-二硝基苯

4. 苯甲酸乙酯

5. 尼美舒利

6. 布洛芬

7. 吲哚美辛

利用UHPLC色谱柱更高的柱效,可在更高的流动相流速下使用更短的色谱柱,以使这种混合物的分离时间缩短80%(相比HPLC色谱柱)。

然而,也可以通过优化键合相的选择性来进一步缩短分离时间,在这个案例中,就是利用了C18-PFP键合相所具有的增强的选择性。

与C18UHPLC色谱柱、C18 HPLC色谱柱相比,ACE Excel C18-PFP UHPLC色谱柱分别将混合物的分离时间缩短了80%以上以及96%,同时保持了所有峰的极佳分离度。

ACE Excel UHPLC色谱柱的设计旨在充分利用低扩散、超高压UPLC®和UHPLC仪器(高达1000 bar),并可与所有市售UPLC和UHPLC系统相兼容。

ACE Excel UHPLC色谱柱可以为碱性化合物提供更佳的峰形,改善柱子与柱子之间的重现性,提供额外的利用多种分离机制的固定相,以及改善色谱柱的耐用性。

ACE Excel UHPLC色谱柱的可用性意味着色谱分析师在使用UPLC和UHPLC仪器时有更多的选择来获得更好的结果。

图 8:ACE Excel色谱柱提供快速、高分辨率的分离

条件

色谱柱:ACE Excel C18, 2 μm, 3.0 x 50 mm

流动相:60秒内从30%B至100%B

A =水+ 0.1%TFA B =乙腈

流速:2.5 mL/min

柱温:40ºC

压力:703 bar (10,335 psi)

检测:PDA, 254 nm

仪器:安捷伦1290 UHPLC

化合物

  1. 乙酰苯胺

2. 苯乙酮

3. 苯丙酮

4. 苯丁酮

5. 二苯甲酮

6. 苯戊酮

7. 苯己酮

8. 苯庚酮

9. 苯辛酮


ACE Excel C18色谱柱可在不到60秒内提供这9种分析物的基线分离。

4.已经证实ACE HPLC色谱柱和ACE Excel UHPLC色谱柱具有持久耐用的、可靠的日常性能和卓越的色谱柱寿命。

通过键合在硅胶固定相载体上的硅氧烷的酸化水解可以失去键合相,从而降低色谱柱的寿命。该酸水解随着流动相pH的降低和柱温的升高而增加。

与C18相相比,较短的烷基相如C4和C3以及苯基相通常更容易失去键合相。此外,低纯度的硅胶固定相载体和低表面覆盖的固定相载体使得一些键合相更易于酸解。

由于使用超高纯度的硅胶固定载体粒子以及键合相的极高表面覆盖,ACE键合相表现出极高的稳定性。(参见图9)

尽管所有ACE键合相的稳定性都很优异,但是一些键合相并不像其它键合相那样稳定。例如,通常认为C18键合比柱长较短的烷基相、PFP相和苯基键合相更稳定。

实际上,典型的苯基固定相稳定性不佳是该相在方法开发中不常被选择的主要原因之一。

为了解决这个问题而开发了ACE C18-AR,其允许色谱分析利用强大的π-π和偶极-偶极分离机制,并仍然享有C18相的坚固性及耐用性。

如图10所示,ACE C18-AR不仅对典型的苯基键合相具有非常优异的稳定性,它甚至还比许多其他C18键合相表现出更佳的稳定性。

类似地,ACE C18-PFP提供了多种分离机制,可以利用它们实现更佳的总体分离效果,同时从C18相的稳定性中受益。

图 9:酸稳定性,pH 1.8

条件

色谱柱:ACE 4.6 x 150 mm

流动相:50% CH3CN, 50%水

流速:1.0 mL/min

温度:22 °C

分析物:菲

酸性暴露条件:

流动相:50% CH3CN 50% 0.1%TFA(溶于水中)(pH 1.8)

流速:1.0 mL/min

温度:22 ℃



互联网
文章推荐