石蜡切片抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）免疫组化染色试剂盒说明
主要用途
石蜡切片抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）免疫组化染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和免疫抗体显色技术，即通过抗酒石酸酸性磷酸酶多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，使用染料二氨基联苯胺染色显示棕褐色，分析存档中的石蜡包埋的组织切片中酒石酸酸性磷酸酶表达和分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋的各种人体、大鼠、小鼠等破骨组织细胞抗酒石酸酸性磷酸酶表达分析。可用于骨质细胞病理生理的研究的鉴定。产品严格无菌，即到即用，显色清晰，操作简捷，性能稳定。
技术背景
抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate resistant acid
phosphatase；TRAP）是一种在哺乳动物内表达的糖化单体金属蛋白酶，970多碱基，320多氨基酸，分子量为35kD。作为破骨细胞的标志，抗酒石酸酸性磷酸酶与破骨细胞调节的骨再吸收（resorption）活性和骨生成代谢有关。抗酒石酸酸性磷酸酶是以酶原形式合成，通过蛋白酶裂解和还原后活化。在酸性环境下，催化磷酸酯键的水解，产生醇和释放磷酸。其特征性为酒石酸抗性而与其它酸性磷酸酶区别。抗酒石酸酸性磷酸酶在破骨细胞（osteoclast）、活化的巨噬细胞、神经细胞以及怀孕期的猪内皮层子宫内膜（endometrium）高度表达。在网状内皮组织增殖（leukaemic
reticuloendotheliosis）或毛细胞性白血病（hairy cell leukaemia）、戈谢病（Gaucher’s
disease）、爱兹性脑病（HIV-induced
encephalopathy）、骨巨细胞瘤（osteoclastoma）、骨质疏松症（osteoporosis）和代谢性骨病等病人体内抗酒石酸酸性磷酸酶显著增高。 通过抗酒石酸酸性磷酸酶多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗（Peroxidase
conjugated antibody）反应，进而使用染料二氨基联苯胺染色显示抗酒石酸酸性磷酸酶表达阳性破骨细胞为棕褐色。
产品内容
脱蜡液（Reagent A） 300毫升（自备）
补水液A（Reagent B） 100毫升
补水液B（Reagent C） 100毫升
补水液C（Reagent D） 100毫升
补水液D（Reagent E） 100毫升
清理液（Reagent F） 120毫升
修复液（Reagent G） 2毫升
封阻液（Reagent H） 4毫升
一抗液（Reagent I） 1毫升
二抗液（Reagent J） 1毫升
显色液A（Reagent K） 500微升
显色液B（Reagent L） 5毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存修复液（Reagent G）、一抗液（Reagent I）、二抗液（Reagent J）和显色液A（Reagent
K）在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在4℃冰箱里；二抗液（Reagent J）和显色液A（Reagent
K），避免光照；有效保证3月
用户自备
小型染色缸：用于石蜡切片的脱蜡和染色操作
盖玻片：用于抗体孵育操作
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析
特别注意
显色液A（Reagent K）和显色液B（Reagent L）必须在实验操作前即刻混匀；混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉
显色液A（Reagent K）如果出现沉淀，须过滤后再用
实验步骤
脱蜡处理
取出10片4至10微米厚的待测石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
（选择步骤）放进80℃烘箱，孵育30分钟
（选择步骤）室温下静置15分钟
按下表依次放进小染色缸里孵育
| 染色缸 | 孵育时间 |
| 50毫升脱蜡液（Reagent A） | 15分钟 |
| 50毫升脱蜡液（Reagent A） | 15分钟 |
| 50毫升脱蜡液（Reagent A） | 15分钟 |
| 50毫升补水液A（Reagent B） | 3分钟 |
| 50毫升补水液B（Reagent C） | 3分钟 |
| 50毫升补水液C（Reagent D） | 3分钟 |
| 50毫升补水液D（Reagent E） | 3分钟 |
小心移去切片上的补水液D（Reagent E）
小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
室温下孵育5分钟
小心移去切片上的清理液（Reagent F）
二、样本修复处理
小心加上200微升修复液（Reagent G），铺满整个切片样品表面
室温下孵育5分钟
小心移去切片上的修复液（Reagent G）
室温下，将切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育5分钟
小心移去切片上的清理液（Reagent F）
小心加上200微升封阻液（Reagent H），铺满整个切片样品表面
室温下孵育30分钟
小心移去切片上的封阻液（Reagent H）
室温下，将切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育5分钟
小心移去切片上的清理液（Reagent F）
免疫标记处理
小心加上100微升含有一抗液（Reagent I），铺满整个切片样品表面
室温下，孵育1小时，保持湿润，避免干燥（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）
小心移去切片上的一抗液（Reagent I）
室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分钟
小心移去切片上的清理液（Reagent F）
四、样本染色处理
在染色前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的显色液A（Reagent K）置入冰槽里融化，然后移取200微升显色液A（Reagent K）和1.8毫升显色液B（Reagent L）到2毫升离心管，充分混匀，标记为显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：
小心加上100微升二抗液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）
室温下孵育30分钟，避免光照
小心移去切片上的二抗液（Reagent J）
室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分钟
小心移去切片上的清理液（Reagent F）
小心加上200微升含有显色液A（Reagent K）和显色液B（Reagent L）的显色工作液，铺满整个切片样品表面
室温下孵育5至60分钟，或直至样本出现棕褐色
小心移去切片上含有显色液A（Reagent K）和显色液B（Reagent L）的显色工作液
室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent F）中浸泡5秒
小心移去切片上的清理液（Reagent F）
（选择步骤）进行甲基绿或苏木素复染（注意：建议使用甲基绿复染试剂盒－YJ40010）
放上盖玻片或封片
即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色
注意事项
本产品为10次操作
操作时须戴手套，以防污染
脱蜡液（Reagent A）可以使用二甲苯替代
清理液（Reagent F）50毫升置于小型染色缸里，可重复使用
所有操作在室温下进行
每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
细胞显色，避免过度，密切目测观察，控制时间
细胞显色完成后，即刻进行光学显微镜观察
本公司提供系列破骨细胞检测试剂产品
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