不同品牌游离核酸保存管的比较（二）

图 4Qubit 结果显示： 三种保存管 7 天内保存效果无明显差异， 14 天时， K 组与 S 组保存管均出现明显的上升，分别是第 0 天的 15.27 倍和 10.21 倍， 21 天时，上升最为明显，分别是第 0天的 22.46 倍和 13.84 倍。 B 组保护剂保存的血液在第 0、 3、 7、 14、 21、 28 天检测时， 每毫升血液 cf-DNA 浓度均无明显的上升。

图 5Beta-actin 绝对定量结果与图 4 基本一致。 B2 组保护剂保存的血液在第 0、 3、 7、 14、21、 28 天检测时， 每毫升血液 Beta-actin 拷贝数均无明显的上升。

3.2 不同天数下（4°C）游离核酸保存效果的对比

图 6Qubit 结果显示： 在 4°C 情况下， 三种保存管 0-14 天的每毫升血液 cf-DNA 浓度并无明显的差异。

图 7Beta-actin 结果显示：在 4°C 情况下，三种保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin 拷贝数并无明显的差异。

3.3 不同天数下（37°C）游离核酸保存效果的对比

图 8Qubit 结果显示：在 37°C 情况下，三种保存管 0-14 天的每毫升血液 cf-DNA 浓度并无明显的差异。

图 9Beta-actin 结果显示：在 37°C 情况下，三种保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin拷贝数并无明显的差异。

3.4 运输环境（25°C）对游离核酸保存效果的影响

考虑到保存管有可能应用于样品的长途或短途运输，因此需用摇床模拟运输环境对保护剂抑制细胞破裂的影响。 S 组、 K 组及 B 组分别采集血液一份，摇床设置 180rpm， 25°C，分别在 0、 3、 7、 14 天检测核酸浓度和 beta-actin 拷贝量。

图 10Qubit 结果显示：在 25°C 模拟震荡情况下，三种保存管 0-14 天的每毫升血液 cf-DNA浓度并无明显的差异。

图 11Beta-actin 结果显示：在 25°C 模拟震荡情况下，三种保存管 0-14 天的每毫升血液Beta-actin 拷贝数并无明显的差异。

4.讨论

（1）从每毫升血液 Beta-actin拷贝数及每毫升血液 cf-DNA浓度两个方面来验证 cf-DNA完整性，已在多篇文献中[4][5]得到验证。
（2） 室温 25°C 下，保存 3 天时， 3 种保存管的差异不显著；保存第 7 天时， E 与 B 组间的差异极显著， B 与 S 组差异具有显著性；保存第 14 天时， B 与 S 组 P value<0.01，差异极显著。 在室温 25°C 下， B 组较 S 组及 E 组，保存时间较长，效果较佳。
（3）室温 25°C 下，三种保存管 7 天内保存效果无明显差异， 14 天时， K 组与 S 组保存管均出现明显的上升，， 21 天时，上升最明显。 B 组保护剂保存的血液在第 0、 3、 7、 14、 21、 28 天检测时，每毫升血液 cf-DNA 浓度均无明显的上升。 在室温 25°C 下， B 组较 S 组及 K 组，保存时间较长，效果较佳。
（4）在 4°C 情况下，三种保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin 拷贝数及每毫升血液 cf-DNA浓度并无明显的差异。 在 4°C 下， B 组、 S 组及 K 组，保存效果无明显差异。
（5）在 37°C 情况下，三种保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin 拷贝数及每毫升血液 cf-DNA浓度并无明显的差异。 在 37°C 下， B 组、 S 组及 K 组，保存效果无明显差异。
（6） 在 25°C 模拟震荡情况下，三种保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin 拷贝数及每毫升血液cf-DNA 浓度并无明显的差异。 在 25°C 模拟震荡情况下， B 组、 S 组及 K 组，保存效果无明显差异。

5.参考文献

[1]MANDEL P, MéTAIS P. Les acides nucléiques du plasma sanguin chez l’homme ［J］ . C R Acad Sci Paris, 1948,142: 241-243.
[2]LEON S A, SHAPIRO B, SKLAROFF D M, et al. Free DNA in the serum of cancer patients and the effect of therapy ［J］ .Cancer Res, 1977, 37(3): 646-750.
[3]STROUN M, ANKER P, MAURICE P, et al. Neoplastic characteristics of the DNA found in the plasma of cancer patients［J］ . Oncology, 1989, 46(5): 318-322.
[4]Norton S E, Lechner J M, Williams T, et al. A stabilizing reagent prevents cell-free DNA contamination by cellular DNA in plasma during blood sample storage and shipping as determined by digital PCR[J]. Clinical Biochemistry, 2013, 46(15):1561-5.
[5] Ryan W L, Fernando R M, Das K. BLOOD COLLECTION DEVICE FOR STABILIZING CELL-FREE PLASMA DNA:, WO 2013123030 A3[P]. 2013.