多色流式实验荧光素的选择（一）

如今，流式细胞术已经成为一项功能强大的技术，可在数秒内对数千个单个细胞或其他颗粒的多项参数进行分析。在流式细胞分析中，荧光素受到一定波长的激光激发后，释放出的能量能发射出一定波长的荧光，因此我们在选择荧光素时应注意它们的激发波长和发射波长，以选择正确的激光器和荧光组合。随着多色流式细胞仪的出现，新荧光素和标记抗体也得到了长足发展。然而为实验中所需抗体选择最佳的荧光染料组合是一个复杂的过程。Elabscience的技术团队总结了一些常用流式荧光素和多色流式细胞中荧光素的选择原则，帮助您避免重复实验和错误，增加实验的成功率：

1. 常用荧光素的种类特性及检测滤片

面对种类繁多的荧光染料，如何知道这些染料是否适合您所拥有的流式细胞仪，以及这些染料间的颜色补偿究竟有多大呢？

注释：

a. 以eFluorTM450为例:最大激发波长为405 nm或407 nm,最大发射波长为450 nm（最大激发波长取决于流式细胞仪激光器的激发光），需440/40 (即检测波长范围为440±20 nm)或450/50 (即检测波长范围为440±25 nm)的带通滤片(BP, Band Pass)。  

b. 以eFluorTM605NC为例:最大激发波长为335 nm, 405 nm或407 nm,最大发射波长为605 nm ，流式细胞仪检测时需605/40 (即检测波长范围为605± 20 nm)的带通滤片。

注释：

a. 表中数值表示各荧光检测通道间的颜色补偿值(compensation),单位为%。  

b. 以FITC和PE为例：若流式细胞仪的FL1通道检测FITC, FL2通道检测PE,则需将仪器的补偿设置为FL1-%FL2=1.10，FL2-%FL1=16.52.具体可理解为PE荧光素的1.10%漏到FL1检测通道,需从FL1中减除，而FITC荧光素的16.52%漏到FL2检测通道，需从FL2中减除。

2. 常见荧光素荧光强度比较

荧光的强度与染色指数(Stain Index)有关，染色指数越高，荧光强度越好；染色指数较低，染色强度相对较差。

通过染色指数可以看出各个荧光素的强度：PE>APC>FITC>PerCP