腺相关病毒感染目的细胞预实验
以2型AAV病毒为例，维真生物为您推荐的MOI值10000:1-100000:1，是根HEK293T细胞得出的数据，不同的细胞所使用的病毒MOI值会有所不同。建议您感染目的细胞前，进行预实验摸索最佳MOI值，推荐使用有荧光的对照病毒来摸索条件。
1. 为了节省病毒，推荐使用96孔板进行预实验。
2. 将目的细胞接种于96孔板中，细胞融合率为50%为最佳。为保证细胞生长良好，请保证细胞贴壁过夜。
3. 取10ul AAV病毒原液加入90 ul培养基中做1:100稀释（10-2），以此为起点做梯度稀释直至稀释10-7。可根据实际情况降低或提高稀释倍数。
4. 取出提前准备好的96孔板，先确定细胞生长状况是否良好。用准备好的病毒稀释液替代旧培养基，注意保留未加入病毒的细胞孔作为对照组。
5. 在加入病毒稀释液后，请在12-24h后观察细胞状态来确认加入的病毒量是否合适，是否因为加入的病毒量影响细胞状态。如果细胞没有变化，即所加病毒对细胞没有毒性，可以继续培养。
6. AAV病毒对细胞的感染较慢，请在感染细胞后每天观察细胞中荧光表达情况。 (成功案例: 山大医院学生
利用我司提供的AAV病毒感染jurkat，ca46细胞,在MOI值105时,
一个星期后看到荧光表达,并且成功通过WB检测到目的基因的表达)（如果您选择的产品带有GFP标签，如果没有荧光标签请选择在96小时以后的不同时间段分别收获细胞并通过Western-Blot或其他检测手段来检测基因表达）。
注：由于AAV组织特异性，体外感染细胞的效率比较低，所以我们强烈推荐您购买AAV用于动物实验。
AAV使用情况实例分析
1.AAV感染不同种类的细胞
HEK293T
AAV虽然也可体外感染一些细胞，但感染效率比较低。具体感染效率可以参考本手册的常见问题解答中的附表。
2.AAV感染神经干细胞
Sorted cells were expanded for an additional26 days (total 40 days after AAV infection), and ~94.5% of cells maintained GFP and nestin expression
Jang J H, Koerber J T, Kim J S, et al. An evolved adeno-associated viral variant enhances gene delivery and gene targeting in neural stem cells[J]. Molecular Therapy, 2011, 19(4): 667-675.
由于AAV的低免疫原性，即便感染干细胞，也不会引起细胞的分化。
3.各种类型的重组AAV注射入不同神经发育阶段的小鼠脑内产生不同分布
Chakrabarty P, Rosario A, Cruz P, et al. Capsid serotype and timingof injection determines AAV transduction in the neonatal mice brain[J]. PloS one, 2013, 8(6): e67680.
注射方法：脑室注射
注射剂量：2×1010 v.p
4.不同血清型的AAV感染心脏心肌细胞
由于组织特异性，即便提高病毒的注射量，对于低表达的血清型，其所携带基因的表达水平没有太大的改善。由图可知，AAV9型对心肌细胞的感染效率极高，AAV8次之。
5.重组AAV1-SERCA2a转导入猪冠状动脉的表达
Hadri L, Bobe R, Molecular Therapy, 2010, 18(7): 1284-1292.
注射方法：冠状动脉注射
注射剂量：1012v.p
6. AAV1特异性感染中枢神经系统以及不同类型AAV感染中枢神经系统的效果
Edmund R Hollis II， Ken Kadoya， Matthew Hirsch， Richard J Samulskiand Mark H Tuszynski ，Molecular Therapy , vol16 ,no. 2, feb, 2008.
注射方法：神经肌肉注射
注射剂量：2.1x10E8 v.p
分别用AAV1-6感染中枢神经系统，AAV1的效果好，感染运动神经元的数目最多。
7.不同血清型AAV 体外注射大鼠5天后在脑的海马回中的表达
Ronald L. Klein, Robert D. Dayton, Nancy J. Leidenheimer, Karen Jansen, Todd E. Golde, and Richard M. Zweig. MOLECULAR THERAPY, 2006, 3 , 13(3).
8.AAV2在研究小鼠脉络膜新生血管形成中作为基因导入的载体
Therapeutic effect of CBAPEDF-AAV2 on choroidal neovascularization development and antibody responses to AAV2 capsid following single and sequential intravitreal injections.A-D:Representative CNV images from mouse eyes that were untreated (A), received a single intravitreal (IV) treatment (B), received first IV treatment (C), and received a second IV treatment (D) of AAV2-PEDF.
Qiuhong Li, Rehae Miller, Ping-Yang Han, Jijing Pang, Astra Dinculescu, Vince Chiodo, William W. Hauswirth. Molecular Vision, 2008, 14:1760-1769.
注射方法：玻璃体腔内注射
注射剂量：4x10E10 V.G.
9.AAV7,8感染视锥形细胞
注射方法：在接近晶状体的虹膜上切开一个小口后，缓慢（20-30秒内）注射。至少在3个星期后进行后续的实验。
注射剂量：2ul。
10. scAAV9 介导的CB-GFP标记静脉注射入大鼠3周后在脑的星形胶质和神经元中表
a:纹状体; b:海马回；c:齿状回；d :小脑浦肯野细胞; e:海马回的椎体细胞f:齿状回的颗粒细胞；a-d 新生鼠 e-f成年鼠（f）200 mm (e); 100 mm (f),50 mm (a–d)Foust K D, et al. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes[J]. Nature biotechnology, 2009, 27(1): 59-65.
注射方法：尾静脉注射
注射剂量：4 × 1011v.p
11.AAV8感染肝脏肝细胞
注射方法：尾部静脉注射
注射体积：200ul、1012v.p
12. AAV9 介导的标记注射成年小鼠7周后在脊髓和大脑的表达
a-d:颈椎，e-h:腰椎，i-l:星形胶质细胞，m-p:脑
Foust K D, et al. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult
astrocytes[J]. Nature biotechnology, 2009, 27(1): 59-65.
注射方法：尾静脉注射
注射剂量：4 × 1012v.p
13. AdVLacZ, AAV2LacZ, 和 AAV8LacZ 介导的标记在C57Bl/6鼠的胰腺中的表达
AdVLacZ AAV2LacZ AAV8LacZ
胰腺胰岛细胞
Wang A Y, et al. Comparison of adenoviral and adeno-associated viral vectors for pancreatic gene delivery in vivo[J]. Human gene therapy, 2004, 15(4): 405-413.
注射方式：胰腺注射
注射剂量： AdVLacZ-108pfu；AAV2，8LacZ-1011v.p
AAV比腺病毒的持续表达时间要长很多，通常AAV可在体内表达数周甚至数月，但是腺病毒仅能表达几天。
14. AAV-1-6，8 和慢病毒介导的GFP在大鼠的脊髓中的表达
Blits B, Derks S, Twisk J, et al.Journal of neuroscience methods, 2010, 185(2): 257-263.
注射方法：脊髓注射
注射剂量：注射5×108v.p不同外壳的AAV 病毒
由图显示，AAV介导的在大鼠脊髓中的基因表达要比慢病毒介导的表达更高。AAV比慢病毒更容易转染脊髓。
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