石蜡切片淀粉样蛋白（AMYLOID）硫磺素T（thioflavine T）荧光染色试剂盒使用说明
主要用途
YIJI石蜡切片淀粉样蛋白（AMYLOID）硫磺素T（thioflavine T）荧光染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和硫磺素T染色技术，与淀粉样蛋白结合，来分析存档中的石蜡包埋的组织切片中苹果绿荧光现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的淀粉样蛋白检测。广泛用于淀粉样蛋白样疾病的病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。
技术背景
淀粉样蛋白（AMYLOID）是一种同质性、嗜伊红性（eosinophilic）、不溶性的纤维蛋白（fibrous protein）聚合体，具有共同的β交叉折叠层（β sheet）组织结构特征，沉积在细胞外。蛋白质错误折叠（misfolding），且异常自我聚集将导致淀粉样变性（amyloidosis），细胞毒纤维沉积，产生组织损伤，进而引起23种不同淀粉样蛋白综合症，超过400种疾病，包括阿茨汉姆症、巴金森氏症、II型糖尿病、白内障、朊病毒疾病等。淀粉样蛋白斑（amyloid plaque）和神经纤维缠结（neurofibrillary tangles；NFT）是淀粉样蛋白综合征的病理性特征。硫磺素T（thioflavine T），阳离子苯并噻唑（benzothiazole）衍生物，在盐酸的参与下，通过脱氢硫甲苯胺（dehydrothiotoluidine）的甲基化而成，是最常用的淀粉样蛋白荧光探针，体内或体外识别显示和定量分析纤维化动力学。较之硫磺素S（thioflavine S），硫磺素T更为稳定和广谱，体内检测更佳，尤其适合在液体状态下检测。一旦与淀粉样蛋白纤维（寡聚体）结合，其荧光强度（激发波长440nm，散发波长490nm），显著增强，呈现苹果绿荧光。
产品内容
YIJI脱蜡液（Reagent A） 毫升（自备）
YIJI补水液A（Reagent B） 毫升
YIJI补水液B（Reagent C） 毫升
YIJI补水液C（Reagent D） 毫升
YIJI清理液（Reagent E） 毫升
YIJI染色液（Reagent F） 毫升
YIJI强化液（Reagent G） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存YIJI染色液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent F），避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月
用户自备
小型染色缸：用于石蜡切片的脱蜡操作
（共聚焦）荧光显微镜：用于组织细胞染色后观察分析
实验步骤
脱蜡处理
取出10片待测的石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
（选择操作）放进80℃烘箱，孵育30分钟
（选择操作）室温下静置15分钟
按下表依次放进小染色缸里孵育
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染色缸 |
孵育时间 |
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xx毫升YIJI脱蜡液（Reagent A） |
15分钟 |
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xx毫升YIJI脱蜡液（Reagent A） |
15分钟 |
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xx毫升YIJI脱蜡液（Reagent A） |
15分钟 |
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xx毫升YIJI补水液A（Reagent B） |
3分钟 |
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xx毫升YIJI补水液B（Reagent C） |
3分钟 |
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xx毫升YIJI补水液C（Reagent D） |
3分钟 |
小心移去切片上的YIJI补水液C（Reagent D）
小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面
室温下孵育5分钟
小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）
二、样本染色处理
小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent F），铺满整个切片样品表面
室温下孵育10分钟，避免光照
小心移去切片上的YIJI染色液（Reagent F）
小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面
室温下孵育1分钟
小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）
小心加上xx微升YIJI强化液（Reagent G），铺满整个切片样品表面
室温下孵育10分钟
小心移去切片上的YIJI强化液（Reagent G）
小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面
室温下孵育3分钟
小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）
封片
即刻在（共聚焦）荧光显微镜下（激发波长440nm，散发波长490nm）观察：
淀粉样蛋白：呈现苹果绿荧光
注意事项
本产品为50次操作
操作时，须带手套
石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎
试剂具有腐蚀性，注意操作安全
试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
组织细胞染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察
槲皮素（Quercetin）、姜黄色素（curcumin）、 藜芦醇（resveratrol）等会干扰检测
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