相反，在阳性对照实验中，TA肌损伤模型中他莫昔芬诱导后可以很容易地检测到tdTomato+ZsGreen-肌细胞（箭头，图3M），而假手术组没有。
图3.
综合上述结果，第2种策略使用Tnnt2-Cre;R26-DreER;IR3也显示出与策略1一致的结果：非心肌细胞在胚胎心脏和成体骨骼肌中转化为肌细胞，但在成体心脏中对肌细胞没有贡献。
策略3 Tnni3-Dre;R26-iCre;IR1
为了进一步验证上述发现，使用另一种肌细胞Marker——TNNI3来驱动Dre重组酶。 Tnni3-Dre在成体心脏中有效且特异性标记肌细胞，但不标记非肌细胞。利用Tnni3-Dre;R26-iCre;IR1小鼠，分别标记肌细胞和非肌细胞（图4A）。
图4. A
通过ZsGreen、tdTomato和不同心脏细胞谱系marker的免疫染色显示肌细胞表达tdTomato、非肌细胞（例如内皮细胞、成纤维细胞等）表达ZsGreen（补充材料）。不给予Dox诱导的情况下，在Tnni3-Dre;R26-iCre;IR1小鼠中未观察到ZsGreen+细胞组织（图4B）。
给予Dox后两周，进行MI或BaCl2注射（图4C），结果发现在假手术的心脏中，Dox诱导后使tdTomato+心脏细胞也被标记上ZsGreen绿色荧光（图4D）。tdTomato、ZsGreen和TNNI3的免疫染色显示所有心肌细胞均为tdTomato+ZsGreen-（图4E）。MI造模后，梗塞的心脏组织中tdTomato+肌细胞数量明显减少，被ZsGreen+非肌细胞替代（图4F）。
分离MI造模后的心肌细胞体外观察均为tdTomato+ZsGreen-细胞（图4G）。 tdTomato、ZsGreen和TNNI3免疫染色显示ZsGreen+细胞在损伤后并没有转向心肌细胞命运（图4H，I）。通过分流式细胞分析和RT-PCR没有检测到MI心脏中有任何ZsGreen+tdTomato-肌细胞（图4J，K）。
相反，在阳性对照实验中，在损伤的TA肌肉中可以检测到ZsGreen+tdTomato-肌细胞（箭头，图4L），表明非肌细胞新生为肌细胞。
图4.
所以，基于Tnni3-Dre;R26-iCre;IR1的第3种模型也揭示了在成体心脏中非肌细胞并不转化为肌细胞。
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