所需仪器:XL03RH型控温离心机(低速冷冻离心机,可使用24*15ml离心管,水平转子);抽血注射器(大小与抽血体积相一致)
试剂:Optiprep;Tricine-缓冲盐溶液(TBS,仅小鼠血)0.85%(质量浓度)NaCl,10mmol/L Tricine-NaOH(ph = 7.4)。
1) 收集人外周血,用EDTA(1mmol/L)或柠檬酸盐(3.8%,质量浓度)抗凝(为了避免对结果的影响,避免使用肝素)。
2) 用CO2麻醉大鼠,收集血液(约10ml),把血液收集到含有1ml 3.8%(质量浓度)柠檬酸盐的10ml注射器里。
3) 用CO2麻醉小鼠,收集血液,把血液收集到含有0.1ml 3.8%(质量浓度)柠檬酸盐的2ml注射器里。
1) 取1.25ml(用于人血)或1.26ml(用于大鼠血)Optiprep与10ml的血液轻轻混血(反复颠倒)。对于小鼠血液(0.5~1.0ml),5.0ml TBS与1.5ml Optiprep混合,然后取该混合液5ml与小鼠血液混合。
2) 在顶上铺少量生理盐水(0.5ml),它可以防止单核细胞在空气/介质分界面形成区带,也避免细胞在血浆/离心管壁交汇处堆积。
3) 在20℃、1000~1200g离心30分钟
4) 用吸管收集弯月面的细胞,除去距沉淀2cm以上的所有上清液。
说明:大多数细胞在血浆/生理盐水分界面处的区带里,但10%~15%在沉淀上面的血浆里。
湖南湘立研制生产的几款医用离心机可以用来进行细胞分离,如DL5M/TDL5M两种型号的低速冷冻离心机可用来进行干细胞实验。XL03RH型控温离心机(低速冷冻离心机)可用来进行温度敏感型人体细胞分离。