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快速了解反转录引物随机引物

2020.5.09
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  随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体这一非特异的引物来拷贝全长mRNA。

  1.特异性引物一般在增低丰度目的基因才选择使用,用得比较少。一般都推荐用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物。由于rna的二级结构破坏不完全,导致特异性引物和其退火难度较大。当PCR 引物定位于RNA 5’-末端时使用随机引物则更加合适。

  2.关于扩增长片段问题,除了引物的问题外,酶的选择和rna的质量也很重要。现在很多公司提供长程酶,对扩增长片段有较好的效果。其次是不能破坏rna的结构,提取时动作要温和。

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