核酸纯化在分子生物学实验室已经广泛应用。怎样获得高质量、高纯度的DNA或RNA样品对下游实验的顺利进行至关重要，因此，对纯化后的核酸进行鉴定也是必不可少的步骤。本文简单的回顾学习一下核酸鉴定的方法。
核酸鉴定包括：浓度/纯度鉴定+完整性鉴定
1.浓度/纯度鉴定
（1）紫外分光光度计：
原理：由于核酸中的碱基都具有共轭双键，所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线，其吸收高峰在260nm处，吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处，所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。
由于核苷酸最大吸收波长为260nm,根据朗伯-比尔定律可计算出在波长260nm的紫外线下，1个OD值的光密度大约相当于50µg/ml的双链DNA， 40µg/ml的单链RNA。紫外分光光度法只适用于测定浓度大于0.25µg/ml的核酸溶液。
计算公式:
dsDNA（µg/µl）=OD260x50x稀释倍数/1000
RNA（µg/µl）=OD260x40x稀释倍数/1000
纯净的DNA OD260/OD280=1.8，制备的样品DNA比值在1.7-1.9，若洗脱时不使用洗脱缓冲液而使用去离子水，比值会偏低，因为PH值和离子存在会影响光的吸收值。
当OD260/OD280< 1.7，表明蛋白质含量较高，可用利用酚、氯仿、异戊醇抽提，再用乙醇沉淀去除。
当OD260/OD280> 2.0，表明RNA含量较高。可用RNaseA消化后再进行纯化。
OD260/OD230的值，一般不小于2.0，若小于2.0，表明有碳水化合物、盐类或有机试剂污染。
实例：基因组DNA提取得率和纯度
FOREGENE Soil DNA Isolation Kit( DE-05511)
特点：
简便—无需研磨、无需低温操作。
快速—90min内完成操作。
安全—无需有机试剂。
本试剂盒处理各种来源土壤样本，获得的基因组DNA量和纯度见下表：
纯净的RNA
OD260/OD280=2.0，制备的样品DNA比值在1.8-2.1
，OD260/OD280比值会受到所用溶液PH值的影响，例如，纯化的RNA在PH=7.5的缓冲液中OD260/OD280读数在1.9-2.1之间，而在中性的水溶液中比值会偏低，可能只有1.8-2.0，这并不意味着RNA的质量变差，所以还需要做电泳检测。
OD260/OD280<1.8时，溶液中可能存在蛋白或者其他有机物的污染。
OD260/OD230的值，一般不小于2.0，若小于2.0，表明有胍盐，β-巯基乙醇或乙醇的残留,但是根据样品不同，比值可能有所变化，如下表中小鼠肾和脑组织提取出的RNA260/230比值偏小。
实例：组织RNA提取得率和纯度
FOREGENE Animal Total RNA Isolation Kit （RE-03012）
特点：
简便—无需低温操作。
快速—30min内完成操作。
安全—无需有机试剂。
本试剂盒处理各种小鼠组织样本，获得的RNA量和纯度见下表：
（2）荧光光度法：
荧光光度法以核酸染料溴化乙锭EB嵌入碱基平面后，使本身无荧光的核酸在紫外线激发下发出橙色荧光，且荧光强度积分与核酸含量成正比。该方法灵敏度可达到1-5ng，适合低浓度核酸溶液的定量分析。另外，SYBR Gold作为一种新的超灵敏的荧光燃料，可以从琼脂糖凝胶中检测出低于20pg的双链DNA。
用溴化乙锭等荧光染料示踪的核酸电泳结果可判定核酸的纯度。由于DNA分子较RNA大许多，电泳迁移率低；RNA中rRNA最多，占80-85%,tRNA及核内小分子RNA占15%-20%，mRNA占1%-5%。RNA电泳后可呈现特征性的三条带。在原核生物为明显可见23S、16S的rRNA条带及由5S的rRNA与tRNA组成的条带。真核生物为28S 、18S 的rRNA及由5S、 5.8S的rRNA和tRNA组成的条带。mRNA因量少且分子大小不一，一般是看不到的。通过电泳分析我们可以鉴定在RNA制品中有无DNA污染，亦可鉴定在DNA制品中有无RNA污染。
2.完整性检测
常规使用琼脂糖凝胶电泳法，基因组DNA的分子量很大，在电场中泳动很慢，如果有降解的小分子DNA片段，在电泳图上可以显著的表现出来。
完整的无降解或者降解很少的RNA电泳图，除具有特征性的三条带外，一般28S (或23S)RNA的荧光强度约为18S（或16S）RNA的2倍，否则提示有RNA的降解（图1）。
RNA样本电泳可能出现明显的三条以上的条带（图2），请不用担心，因为细胞中有些细胞器也含有RNA，如线粒体、叶绿体。如果电泳上样孔附近有着色条带，则说明有DNA污染。
必要时，还可以通过一些特殊的实验分析RNA的完整性，如小规模的第一链cDNA合成反应。
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