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组织经酶解消化后游离出来，细胞的表面通常很脆，易于破裂，分离过程中要尽可能使细胞处于悬浮状态，如处于梯度的屏障层上。如果细胞经离心形成沉淀，在重悬过程中由于剪切作用对细胞可能会有不同程度的损伤。在采用漂浮法分离时，都会应用蛋白水酶解，例如胰蛋白酶、胶原酶等。在随后的清洗过程中这些酶未能彻底从游离细胞中清除，它们会对细胞继续作用，所以有时在4℃下分离，其作用是抑制这些酶的活性。
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