1 原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测尿样、组织、饲料等样本中的盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLE），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的盐酸克伦特罗和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗盐酸克伦特罗抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含盐酸克伦特罗含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中盐酸克伦特罗的残留量。

2 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：0.05ppb(ng/ml)

2.2 反应模式：25℃，30min～15min

2.3 检测下限：

尿液……………………………0.05ppb

组 织（处理法一）……………0.2ppb

组 织（处理法二）……………0.05ppb

饲料……………………………0.5ppb

2.4 交叉反应率：

克伦特罗………………………100%

特普他林………………………<1%

马布特罗………………………<1%

溴布特罗………………………<1%

沙丁胺醇………………………<1%

莱克多巴胺……………………<1%

2.5 样本回收率：

尿样……………………………95%±10%

组织、饲料……………………85%±15%

3 试剂盒组成

酶标板……………………………96孔

标准液：各1ml

0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb

高标准液（红盖）：100ppb………1ml

酶标记物（红盖）…………………5.5ml

抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml

底物液A（白盖）……………………6ml

底物液B（黑盖）……………………6ml

终止液（黄盖）………………………6ml

20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml

10X复溶液(黄盖)…………………50ml

说明书………………………………1份

4 需要的器材和试剂

4.1 仪器：CSY-E96SR瘦肉精快速检测仪、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 试剂：氢氧化钠、乙酸乙酯、浓HCl、乙腈、甲醇、正己烷、无水硫酸钠

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液：

配液1：0.1M HCl 溶液

    取0.86ml浓HCl加去离子水至100ml。

配液2：0.1M NaOH 溶液

    称取0.4g NaOH加去离子水至100ml。

配液3：乙腈-0.1M HCl 溶液

    V乙腈:V0.1M HCl =84:16。

配液4：复溶液

    将10×复溶液用去离子水10倍稀释，用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。

5.3 样本前处理步骤：

5.3.1 尿样处理方法：

直接取50µl清亮尿样进行测定（浑浊尿样需要过滤或经4000r/min离心5min，以得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。

尿样本稀释倍数：1    检测下限：0.05ppb

5.3.2 组织样本处理方法一：

称取均质后的组织样本2±0.05g ，加入6ml复溶液，充分振荡2min，室温4000r/min以上离心10min (若组织样本中油脂含量较高，可在振荡后放入85℃水浴10min后再离心)。取50µl上清液进行分析。

样本稀释倍数：4    检测下限：0.2ppb