一、血清的采集、处理和保存
1、真空采血针采集新鲜血液,加入无菌试管中;
2、采血后室温静置1小时;
3、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min;
4、取上清。分装冻存备用:
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-80℃下,可放置保存6个月;
5、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。
大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异显色。此外还应避免细菌污染,因为菌体中可能含有含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜时检测。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。
二、ELISA 实验中血浆的采集、处理和保存
1、真空采血针采集2ml 新鲜血液,加入无菌试管中;
2、按 1:9加入抗凝剂(EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠),30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集);
3、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心5min;
4、取上清。分装冻存备用,
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-80℃下,可放置保存6个月;
5、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求,建议使用EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA,抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。
三、ELISA 实验中尿液的采集、处理和保存
1、采集尿液样本500ul,加入无菌试管中;
2、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min;
3、取上清。分装冻存备用:
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-80℃下,可放置保存6个月;
4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。
四、ELISA 实验中脑脊液的采集、处理和保存
1、采集脑脊液样本,加入无菌试管中;
2、将采集的脑脊液用离心机4℃,2500rpm 离心10min;
3、取上清。分装冻存备用:
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-80℃下,可放置保存6个月;
4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA 测定。
五、ELISA 实验中细胞上清液的采集、处理和保存
1、采集细胞培养上清液,加入无菌试管中;
2、将采集的细胞上清液用离心机4℃,2500rpm离心10min;
3、取上清。分装冻存备用:
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-70℃下,可放置保存6个月;
4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA 测定。
六、ELISA 实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存
1、10%水合氯醛溶液,腹腔麻醉;
2、打开腹腔,另取10ml注射器行下腔静脉采血,尽可能将血放尽;
3、在冰面上对左肺进行肺灌洗。取37℃生理盐水5ml,分三次灌洗:2ml、1.5ml、1.5ml灌,。回收率在70%以上;
4、将采集的肺泡灌洗液用离心机4℃,2500rpm离心10min;
5、取上清。分装冻存备用:
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-70℃下,可放置保存6个月;
6、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA 测定。