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运用ACQUITY Arc可靠地对肽图分析方法进行转换(三)

2020.5.25
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

比较两个系统时,ACQUITY Arc系统表现出了良好的系统间重复性

 

在整个实验室或其它分析场所中部署新的仪器平台时,确保分析结果的一致性是非常重要的。

为了比较不同ACQUITY Arc系统的分析结果,我们采用具有相同核心配置的两套不同的ACQUITY Arc系统,在如上所述的方法条件下执行分析并采集了数据。这两套系统都配置了30 cm CH被动预加热器。每套系统分析时所采用的流动相和样品都是单独制备的,以模仿实际工业环境中不同分析人员在不同实验室内执行样品分析的情形。如图2所示,两个系统所得的英夫利昔单抗肽图具有良好的一致性。评估两个系统的相对保留时间差异之后可知,相对保留时间的差异不超过0.006(如表2所示)。采用同一平台的两台不同仪器获得了几乎相同的结果,表明了分析结果的可靠性。

 

比较两套不同的ACQUITY Arc系统获得的英夫利昔单抗肽图:A) ACQUITY Arc系统1和B) ACQUITY Arc系统2。实验计算了所有标记峰的相对保留时间。色谱峰的选择由洗脱位置和强度决定。相对保留时间依据峰1计算。

图2. 比较两套不同的ACQUITY Arc系统获得的英夫利昔单抗肽图:A) ACQUITY Arc系统1和B) ACQUITY Arc系统2。实验计算了所有标记峰的相对保留时间。色谱峰的选择由洗脱位置和强度决定。相对保留时间依据峰1计算。

 

通过质谱检测技术可改善UHPLC肽图数据的分离度

在常规的肽监测分析中,我们通常仅使用光学检测技术测定样品的相对保留时间和峰面积,然后将这些数据与参比标准品的数据进行对比,用以确定分析结果是否符合适应性标准。通过引入ACQUITY QDa质谱检测器作为正交检测方法,我们可借助它提供的质量数信息获得更加可靠的产品一致性分析结果。为了获得上述肽图方法的质谱数据,我们在光学检测器之后串联了ACQUITY QDa质谱检测器。本实验采用了填充小粒径颗粒的色谱柱,目的是充分利用ACQUITY Arc系统能够同时运行HPLC和UHPLC分离的优势。本示例用2.5 μm色谱柱替代了3.5 μm色谱柱。我们并未因色谱柱粒度改变而对方法进行缩放,而是沿用了之前的60分钟分析方法,这样可以充分利用小粒径色谱柱带来的分离度和峰容量优势。

 

表2. 比较图2中两套不同ACQUITY Arc系统鉴定出的52个峰的保留时间。系统之间的保留时间差异极小。由计算的_值可知,相对保留时间几乎一样。


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