影响转染实验的因素

影响转染的因素很多，主要因素有以下几个。

一、细胞状态

在开始转染细胞之前，先制定一个适当的种板方案，使细胞密度从转染开始到结束都保持最佳状态。一般低的细胞代数（<50）能确保基因型不变。最适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。

二、DNA质量

DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术，如脂质体等，基于电荷吸引原理，如果DNA不纯，带少量的盐离子、蛋白、代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成和转染的进行。另外，对一些内毒素敏感的细胞（如原代细胞，悬浮细胞和造血细胞），需要在质粒抽提过程中有效去除脂多糖分子，保证理想的转染效果。

三、转染方法

不同的细胞适用不同的转染方法，如果实验室已经建立了全套方法，摸出了最佳转染条件，就照做。如果是新细胞系，最好查看其成功转染案例。可参考转染试剂提供的已经成功转染的细胞株列表和文献资料，如果你的细胞适用，可根据所选转染试剂推荐的方法照做。许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例，细胞数量，培养及检测时间等。ViaFect转染试剂是有创新型混合脂质配方的新生代转染试剂，可用于DNA转染，高效低毒。无需去除血清，导入转染试剂：DNA复合物后，无需洗涤或更换培养基，是目的基因在细胞中表达实验的推荐选择。

ViaFect转染试剂用于贴壁细胞转染操作步骤举例 ：

1、在转染前一天铺细胞，在转染当天细胞汇合度在75%左右。 

2、转染当天，将以无血清培养基稀释DNA。再加入适量ViaFect 转染试剂与DNA构成适当比例，孵育5-20min。 

3、加入适量转染试剂:DNA混合物至细胞培养孔，轻柔混合。 

4、无需去除血清或更换培养条件。孵育24-48h或适当时间，检测结果。无需去除转染混合物。 

5、检测实验结果。 

四、转染试剂

不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如ViaFect转染试剂适用于多种类型的细胞系，成功转染多种类型，包括贴壁细胞，悬浮细胞和干细胞来源的细胞，它在多种难转染的细胞中转染效率更高。另外 ViaFect转染试剂毒性低，能够在转染过程中保持细胞的生物学和细胞代谢，从而更准确的呈现细胞模型的生物学状态。 而且ViaFect转染试剂简单易用，并可进行反向转染(Reverse Transfection)，无需复杂优化。 可以说，同类转染试剂中，ViaFect转染试剂的性价比更高。 （注：反向转染指先在培养板孔中加入DNA：转染试剂混合物，再加入细胞进行转染的方式）

转染载体的构建（病毒载体，质粒DNA，RNA，PCR产物，寡核苷酸等）也影响转染结果。病毒载体对特定宿主细胞感染效率较高，但不同病毒载体有其特定的宿主，有的还要求特定的细胞周期，如逆转录病毒需侵染分裂期的宿主细胞，此外还需考虑一些安全问题（如基因污染）。除载体构建外，载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用，转染也很难进行，因此选择组成或可调控，强度合适的启动子也很重要，同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。