ELISPOT（酶联免疫斑点法）技术

酶联免疫斑点技术(Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISPOT)是细胞免疫学研究中最敏感的检测方法之一，可以在单细胞水平对抗体分泌细胞(ASC)及细胞因子(CK) 分泌细胞进行检测。由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA 和有限稀释法等具有更高的灵敏性，能从20万-30万细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。并且该方法能够对抗原刺激后的活细胞进行功能性检测，具有较高的特异性、直观可信度高，并且易操作，已被广泛用于分泌CK细胞检测或ASC测定中，在国内外免疫学界获得了广泛的应用。

ELISPOT Principle原理：

细胞受到刺激后产生细胞因子，此细胞因子被ELISPOT板底PVDF膜上的特异单克隆抗体捕获。除去细胞后，被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记的亲和素结合。底物孵育后， PVDF 孔板出现紫色或红褐色的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过AID ELISPOT 分析仪（酶联斑点分析系统）对斑点的进行自动化成像、计数和分析。

ELISPOT Protocol方法步骤:

为什么选择ELISPOT assay?

•    高灵敏度：百万分之一阳性细胞检测率, 200x vs ELISA, ~RT-PCR

•    活细胞功能检测：检测到的细胞因子不是已存在的，而是在检测过程中，被加入的刺激物刺激而分泌出来的。

•    直观、可信度高：一个阳性细胞一个斑点，斑点数量代表分泌细胞因子的细胞数量多少，斑点大小代表该细胞分泌细胞因子水平的多少

•    经过冻存复苏的细胞并不丧失免疫功能：这一点对临床试验非常重要，治疗前和治疗后的样本可以并排进行测试，结果可以重复；

•    高通量检测：科研工作者每天可检测数百个样品；只需少量细胞如45毫升血液就足以用于测试600种不同抗原/肽类物质的反应。

在您的免疫学科研中，ELISPOT作为一种有效的研究工具，可以检测抗原特异性的T细胞分泌的细胞因子或者B细胞分泌的抗体，从而进行T、B细胞功能研究。