玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的使用方法（二）

分析步骤

玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的柱容量(最大吸附玉米赤霉烯酮)为1500ng，当样品中玉米赤霉烯酮超过测定范围时，请适当减小上柱体积，使其在检测范围内，计算出准确含量。

1） 样品提取及稀释：

谷物、粮食、花生及其制品、大豆、植物油、调料等样品：（测定范围0-1875 μg/kg） 称取40g磨细的样品，5g 氯化钠；置于250mL具塞锥形瓶中，或匀质杯中。加入100mL乙腈/水（9+1）溶液。以均质器高速匀质提取2min，或摇床震荡60min。取下盖子，将提取物到入槽纹滤纸上，滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液，置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释，混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器，滤液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL准备上柱净化。

饲料样品：（测定范围0-1875 μg/kg）称取40g磨细的样品，5g 氯化钠；置于250mL具塞锥形瓶中，或匀质杯中。加入100mL乙腈/水（8+2）溶液。以均质器高速匀质提取2min，或摇床震荡60min。取下盖子，将提取物到入槽纹滤纸上，滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液，置于干净的容器中。用40 mL pH 7.0 PBS溶液稀释，混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器，滤液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL准备上柱净化。

酒类：（测定范围0-3750 μg/kg）称取20g样品（含二氧化碳类酒称取前置于4℃冰箱冷藏30min，然后过滤或超声制样），置于50mL容量瓶中，加入乙腈定容至50mL，摇匀。移取10 mL上步的溶液，置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释，混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器，滤液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL准备上柱净化。

酱油，醋，酱及酱制品：（测定范围0-3000 μg/kg）称取25g样品，置于100mL容量瓶中，加入乙腈定容至100mL，超声提取2min。将提取物到入槽纹滤纸上，滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液，置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释，混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器，滤液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL准备上柱净化。

2） 样品的净化

将上步10 mL滤液，以1滴/秒的流速全部通过玉米赤霉烯酮免疫亲合柱，直至空气进入到亲合柱中。用10 mL纯水以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱2次。用1.5 mL HPLC级的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗亲合柱，将所有样品淋洗液（1.5 mL)收集于玻璃测试管中。将1.5mL淋洗液用1.5mL纯水稀释，混匀，注入HPLC检测；或将1.5mL淋洗液在50℃氮气下吹干，用1mL流动相定容后，混匀，注入HPLC检测。

高效液相色谱仪检测玉米赤霉烯酮的标准谱图

注意事项

1) 样品添加回收试验时，标准品添加到样品中，静置2小时后或过夜，再进行样品前处理，否则会出现回收率偏低的现象。

2) 不要随便更改操作说明书中的操作步骤，如需更改要和本公司技术部联系，确认更改是否合理。

3) 操作步骤中，样品过柱，淋洗，洗脱时，一定要控制好流速，不能太快，否则会使检测结果偏低。

4) 如果将标准品直接过柱验证回收率时，一定要确保标准上柱液中乙腈浓度不要超过20%，否则会影响柱子的吸附能力。

5) 试验中使用的玻璃仪器等，一定要清洗干净，尤其是用次氯酸等处理过的仪器，否则会使检测结果偏低。

6) 当用氮气浓缩洗脱液时，氮气流不要太大，否则会损失部分玉米赤霉烯酮。

需要准备的设备及试剂