简介：

多数“组学”研究的共同目标是鉴定疾病分子标记物、理解疾病作用机理，进而发现潜在的药物靶点。通常情况下，用于研究的体液因为与活体器官和组织密切接触所以其对身体病理状态特定反应非常灵敏。在脂质组学分析中，通常采用液液提取的方式对血浆的磷脂进行研究。过去也曾有固相萃取的应用。氨丙基硅胶柱也可用于分析脂质，但多着重于脂肪酸，或是会根据洗脱条件的不同进行筛选。Ostro 96孔样品制备板则针对日常生物分析中的小分子进行研究，捕获并去除样本制备过程中大量的磷脂成分。在该通用流程中，脂质保留在Ostro板上，并不进行洗脱。对上样和洗脱条件进行调整，就能实现选择性富集特定类型磷脂或萃取全部磷脂。

实验条件：

样品制备：

人血浆样本来源：新加坡国立大学生物科学中心志愿者，或商业样本（Sigma，P/N P9523）。

萃取流程：

1. 将Ostro板放置在2 mL收集板上，并安置在真空装置上。
2. 使用移液管将100 μL血浆直接上样到Ostro板中。
3. 在孔中加入800 μL乙醇，使用移液管抽吸10次，确保样本充分混合。
4. 混合过后，应用15˝ Hg真空条件，直至溶剂完全排空（约1分钟）。
如在15˝ Hg条件下没有流出液体，可采用更高的真空条件。
5. 重复步骤3和4，并将收集到的流量标记为“流穿”部分。
6. 从真空装置中移除含有流穿部分的收集板，并重新安装新板用于收集洗脱部分。
7. 加入800 μL洗脱溶剂（4.5:4.5:1/氯仿：甲醇：三乙胺）至孔中。
8. 应用15˝ Hg真空条件、直至溶剂完全排空（约1分钟）。
9. 重复步骤6和7，并将收集到的容量标记为“洗脱”部分。
10. 对流穿和洗脱部分进行干燥（使用氮蒸发器，约1.5小时）。
11. 用200 μL 1:1（v/v）氯仿：甲醇复溶洗脱（E）和流穿（FT）部分。

注：请小心确保枪头被放置在样本板的指定位置，避免样本流失或混合。

为便于比较，等量相同的人血浆使用Bligh-Dyer法1 进行萃取。鉴于不同的磷脂种类之间动态差异范围极大，我们分析了两种浓度的样本：未经稀释的、用乙腈按照1/100比例稀释的。采用带有正负切换的多反应监测方法，多反应监测时间设定与特定类型磷脂1 的洗脱时间吻合。该方法的简要介绍如表1所示。

采用预编程TargetLynx™方法对每种成分得到的信号自动积分。平均峰面积阈值设定为1000。