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高内涵成像技术在单抗结合检测中的应用(二)

2020.6.16
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

多波长分析更准确的测定细胞响应    除了荧光图像外,ImageXpress Micro系统还可以捕捉到透射光图像(transmitted light,  TL)从而更准确的鉴别细胞。在这个基于细胞的检测例子中,系统同时捕捉了透射光和荧光图像,并用MetaXpress  软件的用户自定义模块对细胞进行分析。   对同一个孔的荧光图像观察显示抗体已经结合到了细胞表面,但是如果将荧光和透射光图像叠加就可以看到并非每个细胞都和抗体结合在一起(图3,左上)。随后的图像分析正确的筛选出了与抗体结合的阳性细胞(图3,右上)。另一个孔的Cy5通道图像显示出高荧光信号,意味着抗体的有效结合。然而,通过透射光和荧光的叠加分析可以看出此孔中的细胞并未与荧光有效结合(图3,左下)。图像分析确定了这些高荧光信号是由人为因素而非细胞本身引起的,所以这些细胞被标记为未连接到抗体(图3,右下)。        上:Cy5(红色)和透射光(半透明)图像叠加后显示出所有抗体结合的阳性和阴性细胞(左)。分析图中将抗体结合的阴性细胞显示为黄色,阳性细胞(Cy5通道)显示为蓝色,重叠的部分为白色(右)。 下:Cy5(红色)和透射光(半透明)图像叠加后显示出没有与细胞重叠的杂质荧光(左)。分析图中将抗体结合的阴性细胞显示为黄色, Cy5通道阳性但与细胞无关的杂质显示为粉色(右)。    检测实验可以很容易的通过优化二抗浓度来确定条件。在这个例子中,我们用三种不同浓度的二抗来结合宽浓度范围的一抗。就如之前的磁珠检测结果一样,实验显示出了很好的“钩状现象(hook effect)”(图4,上)。当二抗浓度为0.25µg/mL时的最低检测阈值为0.5ng/ml,这一数值与标准的FMAT方法一样。三种浓度的二抗在滴定范围内都显示出了良好的线性(图4,下)。                                                       上:三种不同浓度二抗的一抗滴定实验(显示于X轴)。 下:结果表明,分析物(一抗)在五倍稀释梯度下呈线性关系,其LLD为0.5ng/mL    基于图像的单抗检测分析更具灵活性    与传统的FMAT检测方法相比,应用ImageXpress  Micro系统和  MetaXpress软件的单抗结合高内涵成像分析方法可以提供更多的信息。本系统可以在消除通常人为误差的基础上更快速的得到准确的细胞响应,从而得到更精确的结果。另外,科学家们可以检测配体与细胞表面的结合并进一步在任意波长检测二抗标签,在一个平板上检测不同细胞以及在不影响灵敏度的情况下将检测扩展到1536孔板。

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