引言
干血斑分析法(DBS)在医药行业正变得愈发重要。动物实验所带来的经济及伦理道德方面的问题,以及在运输以及储存生物样品时所产生的高额费用问题,都使得DBS分析法成为一种颇具吸引力的选择。DBS分析法可取得较高的分析物回收率。然而,该技术在去除内源性干扰方面收效甚微。以残余磷脂(PLs)为主的干扰物是生物分析中遇到的主要问题。而LC/MS/MS系统中PLs的蓄积,则是引发基质效应的主要原因。在所有其他问题之中,基质效应会以无可预测的方式影响质谱响应值,降低分析方法稳定性并增加其可变性。Ostro
96孔样品制备板则可消除99%以上的PLs残留。Ostro
96孔板可通过使用96孔制备板的形式进一步简化DBS萃取流程,同时提取分析物、去除磷脂、过滤干血斑纸片。DBS样品可在孔内萃取并稀释直接进样到LC/MS/MS系统中。该创新方法能够显著降低样品制备时间,并在萃取转化、干燥、复溶过程中避免潜在的分析物流失。在本应用纪要中,我们同时应用了传统方法和Ostro
96孔样品制备板方法,对含有利培酮、利培酮羟基化代谢物、9-OH利培酮及其内标氯氮平(图1)的全血样品进行了萃取。
实验部分
ACQUITY UPLC条件
色谱柱: ACQUITY UPLC BEH C18,2.1×50 mm,1.7 μm
流动相A: 0.1% NH4OH 水溶液
流动相B: 50/50 ACN/MeOH
流速: 0.6 mL/min
梯度:
时间 梯度模式 梯度线型
(min) %A %B
0.0 75 25 6
2.0 0.5 99.5 6
3.0 0.5 99.5 6
3.1 75 25 6
3.5 75 25 6
进样量: 40 μL
进样模式: 部分环进样
柱温: 35 ℃
样品温度: 15 ℃
强洗针液: 60:40 ACN:IPA+2% HCOOH
弱洗针液: 95/5 H2O/MeOH
沃特世Xevo TQ-S MS运行条件,ESI+
毛细管电压: 3.0 V
脱溶剂温度: 550 ℃
锥孔气流速: 150 L/Hr
脱溶剂气流速: 1000 L/Hr
碰撞池压力: 2.6×10(-3) mbar
MRM通道监测,ESI+参见表1