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采用Ostro 96孔样品制备板轻松提高DBS萃取物的洁净程度 1

2020.6.16
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

引言
干血斑分析法(DBS)在医药行业正变得愈发重要。动物实验所带来的经济及伦理道德方面的问题,以及在运输以及储存生物样品时所产生的高额费用问题,都使得DBS分析法成为一种颇具吸引力的选择。DBS分析法可取得较高的分析物回收率。然而,该技术在去除内源性干扰方面收效甚微。以残余磷脂(PLs)为主的干扰物是生物分析中遇到的主要问题。而LC/MS/MS系统中PLs的蓄积,则是引发基质效应的主要原因。在所有其他问题之中,基质效应会以无可预测的方式影响质谱响应值,降低分析方法稳定性并增加其可变性。Ostro 96孔样品制备板则可消除99%以上的PLs残留。Ostro 96孔板可通过使用96孔制备板的形式进一步简化DBS萃取流程,同时提取分析物、去除磷脂、过滤干血斑纸片。DBS样品可在孔内萃取并稀释直接进样到LC/MS/MS系统中。该创新方法能够显著降低样品制备时间,并在萃取转化、干燥、复溶过程中避免潜在的分析物流失。在本应用纪要中,我们同时应用了传统方法和Ostro 96孔样品制备板方法,对含有利培酮、利培酮羟基化代谢物、9-OH利培酮及其内标氯氮平(图1)的全血样品进行了萃取。 



实验部分

ACQUITY UPLC条件
色谱柱:  ACQUITY UPLC BEH C18,2.1×50 mm,1.7 μm
流动相A:  0.1% NH4OH 水溶液
流动相B:  50/50 ACN/MeOH
流速:  0.6 mL/min
梯度: 

 时间         梯度模式         梯度线型
  (min)             %A    %B
  0.0                75    25           6
  2.0                0.5 99.5         6
  3.0               0.5 99.5         6
  3.1                 75 25            6
  3.5                 75   25            6
进样量:  40 μL
进样模式:  部分环进样
柱温:  35 ℃
样品温度:  15 ℃
强洗针液:  60:40 ACN:IPA+2% HCOOH
弱洗针液:  95/5 H2O/MeOH

沃特世Xevo TQ-S MS运行条件,ESI+
毛细管电压:  3.0 V
脱溶剂温度:  550 ℃
锥孔气流速:  150 L/Hr
脱溶剂气流速: 1000 L/Hr
碰撞池压力:  2.6×10(-3) mbar
MRM通道监测,ESI+参见表1



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