样品制备条件
将20 μL的全血样品滴在未经处理的Whatman DMPK-C血卡上。样品随后在室温下干燥2小时。使用Harris 3 mm微打孔器取3 mm血斑，分别放置进传统型DBS萃取法所需的1.5 mL离心管和Ostro 96孔板孔中。传统萃取方法在1.5 mL离心管中进行，使用了250 μL含5%水的甲醇溶液，随后样品进行1分钟涡旋、1分钟3000 g离心，并最终将萃取物转移至96孔板上。使用Ostro 96孔板的萃取则采用单步孔内萃取法。在Ostro 96孔板中添加3 mm干血斑（图2）。以250 μL含5%水的甲醇溶液作为萃取溶液，涡旋操作1分钟、真空操作5分钟。两种方法产生的洗脱液都用250 μL 的水进行稀释，然后进样到LC/MS/MS系统中。 

结果与讨论
在正离子模式下进行MS分析。鉴于DBS萃取物的直接进样通常会导致极稀释的样品，我们采用Xevo TQ-S以显著提升系统的灵敏度。这同时也有助于直接进样，并避免了吹干、复溶过程中可能存在的问题。
针对每一种样品制备方法，我们都比较了磷脂残留量。为了达成这一目的，我们对单个试管萃取和使用Ostro PLR板孔内萃取的DBS进行了比对，对五种磷脂进行了量化。与传统型DBS分析法相比，Ostro板去除磷脂比例高达99.9%（图3）。为能直观展示残余磷脂，传统型DBS萃取法和使用Ostro的孔内DBS萃取法所产生的五种不同磷脂的总离子流（TIC）如图所示（图4）。当使用Ostro板时，磷脂残留量几乎可忽略不计，且无蓄积情况。而当使用传统型DBS法时，即便出于预防磷脂蓄积的目的，采用高比例有机溶剂进行了1分钟的清洗，磷脂残余量依旧显著，而且在整个过程中都有蓄积。我们进行了半验证，计算QC样品浓度不足预期值的15%，满足法规标准。9-OH利培酮（图6）及其母化合物LLOQ在全血中都达到 0.05 ng/mL。标准曲线在3个以上数量级呈线性，全血中的线性范围从0.05 ng/mL到50 ng/mL（图7）。

 结论
  ■ 简便、单步的DBS样品制备方法
  ■ 相较于传统的DBS萃取技术，去除残余磷脂含量高达99.9%
  ■ 采用Xevo TQ-S质谱仪，获得高灵敏度
  ■ 去除LC色谱柱中PLs的蓄积