实验方法原理 | 选用Wistar大鼠经消化酶灌注肝脏后,用分离液分离HSC,通过观察其自发荧光及其显著特征性结构的脂肪染色、细胞免疫化学染色等方法鉴定。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 |
2. 以D-Hanks’液灌注,同时剪开下腔静脉,冲掉血液后,改灌以100 ml 酶消化液I(0.05% IV 型胶原酶)。
3. 待肝脏变软后,离体肝脏并剪碎,继续以酶消化液II(含20U/ml DNase I 的0.05% IV 型胶原酶)消化15 min,尼龙网过滤后以450 g 离心5 min(4℃,下同)。
4. 以HBSS 重悬沉淀至10 ml,再混以20 ml Nycodenz 液,分置于离心管中,并分别覆以2-3 ml HBSS,1450 g 离心16 min 后取界面细胞。
5. 以HBSS重悬后再次离心收集细胞,以DMEM重悬后进行细胞计数,并判断存活率和产量,最后按照常规方法接种(105 细胞/cm2 ),次日换液,以后每2-3 天换液一次。
接种次日,光镜下可见细胞呈星芒状,胞质内有脂滴,荧光镜下328 nm 处见自发荧光。附照片(图 1)。 收起 |
其他 | 一、讨论 1. 袁桃霞,张锦生,张月娥,等. 大鼠肝 Ito 细胞的体外培养及肝素对其抑制作用的观察. 上海医科大学 学报,1996,23(2):90-93.
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