新生大鼠心肌细胞原代培养可以:(1)细胞保种;(2)用于细胞形态研究;(3)应用于临床研究。
胰酶消化法
实验方法原理 | 将大鼠的心肌细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。 |
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实验材料 | SD 乳鼠 |
试剂、试剂盒 | 低糖 DMEM、胰酶 EDTA 青链霉素 碳酸氢钠液 新生牛血清 谷氨酰胺 D-Hank's 液 新洁尔灭 碘酒 酒精 |
仪器、耗材 | 铝盒 眼科直剪 眼科弯剪 眼科直镊 眼科弯剪 玻璃培养皿 广口瓶 棉球 烧杯 锥形瓶 离心管 磁力搅拌器 搅拌子 水浴振荡器 尼龙筛网 针式滤器 |
实验步骤 | 一、实验材料准备 1. 动物 出生后 1-4 天 SD 乳鼠 15 只。
2. 试剂 低糖 DMEM、胰酶(含 EDTA)、青链霉素、碳酸氢钠液、新生牛血清、谷氨酰胺、D-Hank's 液。0.1%新洁尔灭、碘酒、75%酒精,培养液(DMEM,新生牛血清,青链霉素)。
3. 手术器械和仪器 铝盒、眼科直剪、眼科弯剪、眼科直镊、眼科弯剪、玻璃培养皿(共 2 套,一套用于解剖取材,另一套用于剪碎心脏组织)、100 ml 广口瓶两个(分别装碘酒和酒精棉球)、500 ml 烧杯、250 ml 锥形瓶、15 ml和 50 ml 的离心管,磁力搅拌器和搅拌子(或者水浴振荡器)、150-200 目尼龙筛网和针式滤器。
二、方法 1. 将胰酶用 D-Hank's 液配成 0.06%的浓度,并放置于 37℃水浴中温育好。
2. 解剖取材:将乳鼠放入
0.1%新洁尔灭浸泡一下后拿出,用另一把大镊子取碘酒棉球擦皮肤,再用酒精棉球脱碘。左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部,右手取一把眼科直剪剪开皮,充分撕拉开,再用酒精棉球消毒后,取一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨,然后在切口中间横剪胸骨。这样只要左手稍顶,乳鼠的心脏就直接跳出来。然后用眼科弯镊从心脏中部直接将心室部分剪下,放入冰浴的
D-Hank's 液中。重复以上过程。取材完毕后,撤掉取材的手术器械。 |