禽流感H5，H9，鸡新城疫病毒ELISA检测试剂盒使用说明书

【产品简介】禽流感H5，H9，鸡新城疫病毒ELISA检测试剂盒用于免疫新城疫疫苗后的抗体动态水平监测，指导免疫预防工作，评估鸡场禽流感H5，H9，鸡新城疫病毒疫苗免疫状况，也可用于该病的流行病学调查。

【产品内容】

【成分性状】

【用法与判定】 

1、需要自备的器材

1.1微量移液器；

1.2 微量移液器配套使用的枪头；

1.3 用来稀释洗涤液的500ml量筒；

1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪；

1.5 用于稀释样品的1.5ml Ep管；

1.6 蒸馏水或去离子水。

2、样品的制备 

用样品稀释液将待检血清样品进行100倍稀释（建议：2μl血清样品加入198μl样品稀释液中），样品加入包被板前要充分混匀，稀释不同待检样品注意更换枪头。注意：①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生；②不能稀释阴性、阳性对照。

3、操作步骤（﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀，所有试剂应恢复至室温）

3.1  在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照；

3.2  在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照；

3.3  取100μl经1：100稀释好的待检样品加入相应孔中，并做好记录；

3.4  37℃孵育1h；

3.5  将各孔的液体弃入废液桶，每孔加250μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释）进行洗板，重复5次，每次30s；

﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果，尽量将孔内洗涤液抛甩干净；

3.6  每孔加100μl酶标结合物；

3.7  37℃孵育1h；重复步骤3.5；

3.8  每孔加100μl底物液；

3.9  37℃孵育10min（避光显色）；

3.10 每孔加100μl的终止液；

3.11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD450值。

4、试验有效性判断

4.1阴性对照：正常情况下，阴性对照孔OD450值≤0.2；

4.2阳性对照：正常情况下，阳性对照孔OD450值≥0.4；

4.3临界值(C.O.)计算：临界值=0.20+阴性对照均值；阴性对照OD450值大于0.2时应舍弃，如所有阴性对照OD450值均大于0.2时须重复实验；阴性对照低于0.05时以0.05计算。

4.4结果判定： 检测样品OD450值≥临界值，判定该检测样品为阳性； 检测样品OD450值＜临界值，判定该检测样品为阴性。

【注意事项】

（1）待检血清样品数量过多时，应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后，再统一将血清样品加入酶标板中，使反应时间一致。

（2）试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。

（3）底物液和终止液对皮肤有刺激性，注意防护。

（4）底物液不要暴露于强光和任何氧化剂；使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。

（5）所有试剂应在2～8℃存放；使用前恢复到室温，使用后放回2～8℃。

（6）注意防止试剂盒组分受到污染。

（7）不要使用超过有效期的试剂，不同批次试剂盒的组分不要混用。

（8）操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。

【规格与包装】96T×1

【贮藏与有效期】2～8℃避光保存，有效期为6个月