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土壤基因组DNA提取试剂盒使用说明

2020.6.29
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

本试剂盒提供了从各种来源的土壤中快速简便的提取基因组DNA的方法。土壤样品中存在大量的抑制因子如腐殖酸、金属离子等,这些物质即使微量存在于纯化后的DNA中也会对下游反应,如对PCR、限制性酶切等产生影响。因而纯化土壤DNA的关键在于如何有效的去除土壤中的抑制因子。
采用本公司特有的DNA-only硅胶膜离心柱和溶液配方,搭配Foregene Protease,可以有效的去除土壤中各种抑制因子,无需有机溶剂抽提或乙醇及异丙醇沉淀,在90分钟内即可完成对土壤样品中DNA的提取操作。

产品特点
 无RNA酶污染:无需额外添加RNA酶即可去除基因组DNA中的RNA,避免实验室遭受外源RNA酶污染。
 速度快:操作简单,土壤基因组DNA提取操作在90分钟内即可完成。
 方 便:离心操作均在常温,无需4℃低温离心或乙醇沉淀DNA。
 安 全:无需有机试剂抽提。
 质量高:提取获得的基因组DNA片段大、无RNA、无RNA酶、离子含量极低,能满足各种实验的要求。

操作步骤
使用前请先在Buffer WB中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1. 称取0.5g土壤样品,置于2ml离心管中。 注意:如果样本是悬浊液,可13,300rpm(17,000×g)离心1min,收集沉淀后再称取0.5g置于2ml离心管中。
2. 向离心管中加入1ml Buffer TE、100μl Lysozyme(配制方法见第五页)充分混匀后,37℃摇床温浴30min(转速:180rpm/min)。
3. 7,200rpm(~5,000×g)离心5min(离心转速有多大影响),用移液器吸除上清。 注意:应尽量吸净残留上清,以免影响后续操作。
4. 向留有沉淀的离心管中加入600μl BufferSG1,上下颠倒充分混匀,加入50μl Foregene Protease,50μl Buffer SG2,涡旋充分混匀。 注意:使用前请检查Buffer SG2是否有沉淀产生,如有沉淀产生,请将溶液置于65℃温育,直至沉淀溶解后使用。
5. 将离心管置于65℃水浴或金属浴30min,其间每隔10min上下颠倒充分混匀一次。
6. 向离心管中加入 600μl Buffer SG3,上下颠倒充分混匀,置于65℃水浴或金属浴10min,其间每隔4min上下颠倒充分混匀一次。
7. 12,000rpm(~13,400×g)离心5min,用移液器将上清液转移至新的2ml离心管中,应避免吸到沉淀。
8. 向离心管中加入20μl Buffer SG4,280μl乙醇(96-100%)涡旋充分混匀10s,可以瞬时离心收集附着在管盖和管壁的液滴。
9. 将离心柱放入收集管中,取800μl混合液加入离心柱中,12,000rpm(~13,400×g),离心1min。
10. 倒掉收集管中废液,将离心柱放回收集管中,将剩余混合液全部加入离心柱中,12,000rpm(~13,400×g),离心1min。
11. 倒掉收集管中的废液,将离心柱放回收集管中,向离心柱中加入500μl Buffer PW,12,000rpm(~13,400×g),离心1min。
12. 倒掉收集管中的废液,将离心柱放回收集管中,向离心柱中加入700μl Buffer WB,12,000rpm(~13,400×g),离心1min。
13. 重复步骤12一次。
14. 倒掉收集管中的废液,将离心柱放回收集管中, 12,000rpm(~13,400×g)离心1min。
15. 将离心柱转移至新的2ml 离心管中,向膜中央悬空滴加100μl 已于65℃预热的Buffer EB,室温放置5min,12,000rpm(~13,400×g) 离心1min。再次向膜中央悬空滴加100μl 已预热的Buffer EB,12,000rpm(~13,400×g) 离心1min。将两次收集的洗脱液合并。

注意:如果希望提高DNA的浓度,可将第1次离心得到的溶液重新加回离心柱中,12,000rpm (~13,400×g) 离心1min。


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