乳制品中核苷酸分析

乳粉中添加尿苷酸（UMP）、胞苷酸（CMP）、腺苷酸（AMP）、鸟苷酸（GMP）、肌苷酸（IMP）等多种核苷酸，用来提高婴儿的免疫调节功能和记忆力。

核苷酸分析目前存在的挑战：

由于核苷酸极性很大，用反相色谱柱很难达到很好的保留和分离，所以为了提高核苷酸的保留往往会尝试离子对色谱方法，离子对色谱方法存在以下问题：

1.   容易起泡，管路中有气泡，影响分析

2.   平衡时间长，延长了分析工作时间

3.   难以清洗，对色谱柱有损伤

4.   易变质，容易堵塞管路，损伤仪器

沃特世公司（Waters^®）解决方案：

1.   避免使用离子对试剂，仅需要使用挥发性乙酸铵、乙腈体系

2.   建议使用Oasis^® HLB SPE小柱利用通过净化方式进行乳粉样品前处理，提供更洁净的样品，提高灵敏度、延长色谱柱及仪器寿命

3.   使用Amide色谱柱分析，用一般反相流动相保留极性化合物，方法简单快速

实验结果及色谱图

5种核苷酸混合标准品的6针连续进样分析结果

实际样品6针连续进样分析图谱

小结：

本实验采用Waters ACQUITY UPLC^® H-Class 系统，BEH^TM Amide 1.7μm 2.1*100mm色谱柱，对婴幼儿奶粉中的5种核苷酸进行分析方法的开发，实验结果表明：

1.    在Waters ACQUITY UPLC H-Class 系统上，采用BEH Amide 1.7μm 2.1*100mm色谱柱能迅速分离奶粉中5种核苷酸标准品，且5种化合物的分离度均在3.0以上；对于实际的奶粉样品，5种核苷酸样品及杂质之间的分离度均在1.6以上。

2.    该分析方法重现性好。其中，奶粉样品6次连续进样分析结果中，5种核苷酸保留时间RSD值均小于0.12%。

3.    Waters ACQUITY UPLC H-Class 系统，具有四元溶剂的Auto•Blend Plus^TM功能，因此，在该系统上进行方法开发非常灵活、方便，节约了溶剂配置的大量时间，大大提高了实验的效率，从而大幅度的降低了实验的溶剂消耗，降低了实验成本。