试剂的准备
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
400 nmol/L (6号标准品) 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
200 nmol/L (5号标准品) 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
100 nmol/L (4号标准品) 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 nmol/L (3号标准品) 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 nmol/L (2号标准品) 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
12.5 nmol/L (1号标准品) 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 nmol/L (空转移趋化生长因子β1对照) 原始浓度不用稀释直接加入50ul。
洗涤缓冲液(50×)的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1、使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空转移趋化生长因子β1孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7、每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8、取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9、在450nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案
标准品浓度(nmol/L)
A 400 400 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
B 200 200 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
C 100 100 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
D 50 50 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
E 25 25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
F 12.5 12.5 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y)，相应的IMMT标准品浓度为横坐标(X)，做得相应的曲线，样品的IMMT含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-400nmol/L
4、敏感度： 1.0 nmol/L
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