ELISA试剂盒实验中每一个步骤都尤为重要，细节不容忽视，它是实验成功的关键与否；在这

　　里本司为方便各位了解，更好的完成实验，特对高灵敏ELISA试剂盒操作步骤中的忌讳做出以

　　下分析，供大家参考：

　　1、吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，吸取的量不够准确。

　　2、手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一

　　酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。

　　3、底物为TMB，避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性，应尽量避免接触皮

　　肤。

　　4、加样后及时放人孵箱，标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育

　　时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。

　　5、作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。

　　6、剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分

　　钟后废弃。

　　7、同批号试剂组分不得混用。

　　8、洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

　　9、每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。

　　测量时先用此孔调OD值至零。

　　10、要确保微量加样器的准确性，可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质

　　，温度环境为20%左右时，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样

　　器都应该将其最高量程和最低量程进行确定。

　　11、在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换枪头，即使吸取标准品溶液。

　　12、检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具

　　有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。

　　13、操作前仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用

　　。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进，比如洗板次数的掌握等。

　　14、评估试剂的实用性，试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行

　　阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。

　　15、加样要准确、快速。加样不准确，酶生成物的量不能确定，直接影响显色结果。另外，显

　　色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关，所以加样应慎重。要求在一定时间内加

　　样完毕的实验，如果加样迟缓，便出现误差，而且试剂长时间暴露在外，尤其室温过高时，保

　　存期会缩短甚至失效。

　　16、使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要

　　17、严格掌握显色时间，显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出

　　现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立

　　即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。

　　18、洗涤彻底，洗板不彻底，酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外，洗涤液要新鲜，现用现

　　配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。

　　19、严控反应时间，反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物

　　抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。

　　20、ELISA检测操作步骤复杂，可强各环节的质量控制，才能得到准确可靠的检测结果。

　　愿以上这些能对您有所帮助，如果您还有什么疑问，欢迎来电我司咨询。

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