实时荧光 RT-PCR 方法检测新型冠状病毒核酸
(一)目的。
规范实时荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸的工作程序,保证实验结果的正确可靠。
(二)范围。 copyright sysqy.com
适用于实时荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸。
(三)职责。 内容来自实验室前沿网站
检测人员:负责按照本检测细则对被检样本进行检测。 sysqy.com
复核人员:负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核。
部门负责人:负责对科室综合管理和检测报告的审核。
(四)样本接收和准备。
核对被检样本姓名、性别、年龄、编号及检测项目等;
待检样本的状态如有异常,需注明;
待检样本应存放于-70℃冰箱保存。
(五)检测项目。
1.新型冠状病毒核酸测定(实时荧光RT-PCR方法) 推荐选用针对新型冠状病毒的ORF1ab、N基因区域的引物和探针。
靶标一(ORF1ab): copyright sysqy.com
正向引物(F):
CCCTGTGGGTTTTACACTTAA 反向引物(R):
ACGATTGTGCATCAGCTGA
荧光探针(P):
5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'
靶标二(N):
正向引物(F):
GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT 反向引物(R): 内容来自实验室前沿网站
CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG
荧光探针(P):
5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3'
核酸提取和实时荧光RT-PCR反应体系及反应条件参考相关厂家试剂盒说明。
2.结果判断 阴性:无Ct值或Ct≥40。
阳性:Ct值<37,可报告为阳性。
灰度区:Ct值在37-40之间,建议重复实验,若重做结果Ct
值<40,扩增曲线有明显起峰,该样本判断为阳性,否则为阴性。 内容来自实验室前沿网站
注:如果用的是商品化试剂盒,则以厂家提供的说明书为准。