腺病毒 IgM ELISA试剂盒使用说明

1、应用范围

此酶免试剂盒可用于人血清和血浆中抗腺病毒IgM抗体的定性和定量检测。

2、前言说明

腺病毒是人和动物体内普遍存在的一种病原体，可分为许不同的血清型。腺病毒是一种常年存在所有人群中的地方性疾病。这种传染病可以通过空气传播，也可通过尘埃传播。腺病毒主要感染呼吸道黏膜和肠道黏膜，也会感染角膜。它们主要集中于上皮细胞和局部附属淋巴结。腺病毒可引起各种已知的呼吸道病毒性疾病：呼吸道疾病、肺炎、与游泳池相关的咽结膜炎高烧和角膜结膜炎流行病。腺病毒的肠内感染主要出现在小于一岁的小孩中。它主要特点是出现流行性急性肠胃炎，通常是由腺病毒40和41引起的。分离腺病毒或血清学检测可以检测是否急性腺病毒感染。腺病毒的血清学检测特别重要，因为它可确定病人是否是急性腺病毒感染，另外它也用于大型流行病学的调查研究。ELISA主要测抗六联体成分上群特异性决定簇的抗体。建议用于检测特异性抗体的检测方法有：血凝抑制和血清中和实验。由于腺病毒到处都存在以及相关血清型之间的交叉反应，为了确定感染，可使抗体浓度提高4倍或更高的血清转化就很有必要了。在血清学检测中，IgG是主要被检测的抗体。

3、实验原理

此固相ELISA试剂盒利用的是夹心法。包被孔中包被了抗原。用对IgM具有特异性的酶标二抗来检测结合到包被抗原上的样品特异性抗原。底物反应后，所显示的颜色强度与IgM特异性抗体的浓度成正比。样品的结果可直接用标准曲线获得。

4、试剂盒组成：

5、实验所需材料但试剂盒不提供

1)       RF吸附剂

2)       移液器，体积：5；50；100；500 µL

3)       校准仪

4)       样品稀释用试管（1ml）

5)       带试剂储器8道移液器

6)       洗涤瓶，自动或半自动洗板机

7)       能在450nm处读数的酶标仪

8)       双蒸水或去离子水

9)       吸水纸，取样吸头和计时器

6、实验前的准备说明

6.1成分准备

6.2样品稀释

6.3用RF吸附剂处理：

为了避免吸附特异性抗体，应当避免温育时间＞15min。

预处理的样品可能会是浑浊的。

7、实验步骤：

1)       加100µL标准品、质控品或已稀释样本于相应反应孔中，在定性检测中只使用标准品B。

2)       封板后室温（18℃-25℃）温育60分钟。

3)       移去粘性金属板，弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。

4)       在每一微孔中加入100µL酶联物。

5)       封板后室温（18℃-25℃）温育30分钟。

6)       移去粘性金属板，弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。加底物液和终止液时，如果有条件的话，可使用8孔微量移液器。确保底物液和终止液都是相同的时间间隔加入。使用确切容积并避免气泡产生。

7)       每孔加TMB底物液100µL。

8)       室温（18℃-25℃）避光温育20分钟。

9)       在每一微孔中加入100µLTMB终止液以终止底物反应。轻轻摇动包被板以使试剂混合均匀。此时，颜色蓝色变成黄色。

10)    加终止液后60分钟内在450nm处测OD值。

8、结果计算

在半对数坐标纸上或用自动生成的方法，以标准品的OD值为Y轴，浓度为X轴，绘制一标准曲线图。用立体图、4参数对数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。对于标准曲线图，用标准品的每一单值进行计算（样品结果明显异常的值必须删除掉，应使用更加合理的单值）。样品的浓度可直接从标准曲线上获得。一旦样品稀释了，就应当乘以相应的稀释因子。如果样品所测得的浓度高于最高标准，则应根据实验前的准备说明所述对样品进行稀释，并重新检测。

9、结果判定： ＞ 12 U/ml  为阳性,8 - 12 U/ml  为可疑,＜ 8 U/ml  为阴性

此检测结果并不是任何治疗结果判定的唯一因素，它应当结合临床观察和诊断结果加以判断。

本译文仅供参考，详情请以原文为准。