液相色谱仪只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。

　　液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

　　液相色谱仪按其分离机理，可分为四种类型。

　　吸附色谱法的固定相为吸附剂，色谱的分离过程是在吸附剂表面进行的，不进入固定相的内部。与气相色谱不同，流动相（即溶剂）分子也与吸附剂表面发生吸附作用。在吸附剂表面，样品分子与流动相分子进行吸附竞争，因此薄层色谱(TLC)流动相的选择对分离效果有很大的影响，进口液相色谱仪一般可采用梯度淋洗法来提高色谱分离效率。

　　在聚合物的分析中，吸附色谱一般用来分离添加剂，如偶氮染料、抗氧化剂、表面活性剂等，也可用于石油烃类的组成分析。

　　分配色谱法

　　这种色谱的流动相和固定相都是液体，样品分子在两个液相之间很快达到平衡分配，利用各组分在两相中分配系数的差异进行分离，类似于萃取过程。

　　一般常用的固定液有（ODPN）、聚乙二醇（PEG400～4000）、三甲撑乙二醇（TMG）和角鲨烷（SQ）。采用与气相色谱（GC）同样的方法，将固定液涂渍在多孔的载体表面，但在使用中固定液易流失。目前，应用较多的是键合固定相。在这种固体相中，固定液不是涂在载体表面，而是通过化学反应在纯硅胶颗粒表面键合上某种有机基团。

　　例如，利用氯代十八烷基硅烷与硅胶表面的羟基（-OH）之间的反应就可以形成一烷基化表面。这种固定液的优点是不易被流动相剥蚀。在分配色谱法中，流动相可为纯溶剂薄层色谱(TLC)，也可以采用混合溶剂进行梯度淋洗，其极性应与固定液差别大一些，以避免两者之间相溶。

　　与试样预处理技术相配合，液相色谱仪所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。

　　液相色谱仪有“四高一广”的特点：

　　①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

　　②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

　　③：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

　　1、使用甲醇作流动相，请注意自身保护和环境保护，废液注入空瓶内，集中处理，不得倒入下水道内。

　　2、输液泵使用前，先注意探漏检查，视各密封点和泵体有否漏液薄层色谱(TLC)。

　　3、在无流动相通入的情况下，严禁启动泵体电机，以免柱塞密封环磨损。

　　4、测试泵流量性能时，用于收集液体的容器，应选用小口瓶颈的容器，防止收集过程中，溶液蒸发，影响测量精度。必要时应将其密封存放在干燥容器内，以预防光学系统霉变。

　　5、金属泵体的输液泵，应尽量避免使用含有卤离子（如KCL、NaCL、NH4CL）的流动相或能产生卤离子的流动相，若必须使用此类流动相，建议使用泵体用非金属材料制造的输液泵。方则使用后，应立即使用去离子水清洗泵体和整个色谱系统的管路。

　　6、使用的流动相必须是HPLC级或分析纯级，特别是配置的流动相，在使用前，必须过滤掉其中的颗粒状杂质和其他物质（使用0.45μm的滤膜过滤）

　　7、长期不使用输液泵，应在后分析结束时，用注射器吸取去离子水通过专用的泵头清洗孔清洗泵体和柱塞杆。以延长密封圈和宝石柱塞杆的寿命。

　　8、输液泵液路在维修或保养时，应切断仪器电源。非专业维修人员请不要打开机箱罩。

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