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高效液相色谱仪应用举例(二)

2020.7.06
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

例5.茶碱分析(茶叶)

样 品:含茶碱等三种物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:UV紫外检测器,280nm

色谱柱:Micro μBondapak C18 ,8μm,柱长25 cm,柱径4.6 mm

流动相:二甲基二酰胺:甲醇:醋酸:水 = 23.5:1:0.5:75(v/v)

流 速:1mL/min

进 样:10μL

结 果:所有组分8min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为可可碱,峰2为茶碱,峰3为咖啡碱。

例6.脂肪酸直接分析

样 品:未经衍生处理的亚麻酸等6组分的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵,色谱工作站

检测器:500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为65℃,氮气流速为2.0L/min

色谱柱:AlltimaTM C18 ,5μm,柱长25cm,柱径2.1mm

流动相:A为水,B为乙腈

梯 度 时间 0min 10min 15min 20min

A 13% 20% 20% 5%

B 77% 80% 80% 95%

流 速:0.4mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分20min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为亚麻酸,峰2为肉豆蔻酸,峰3为亚油酸,峰4为棕榈酸,峰5为油酸,峰6为硬脂酸。

例7:氨基酸衍生物分析(食品分析)

样 品:22种氨基酸的苯基乙酰硫脲混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,梯度洗脱装置,色谱工作站

检测器:UV紫外检测器,波长254nm

色谱柱:柱长25cm,柱径0.46cm Zorbax ODS柱(Dupont)

流动相:A液为0.01mol/L的NaAc, pH =4.5

B液为CH3CN

梯 度:0min~6min B/A = 24/76~42/58(v/v)

6min~14min B/A = 42/58(v/v)

14min~20min B/A = 24/76(v/v)

流 速:1mL/min

进 样:自动进样器进样10μL

结 果:所有组分在20min之内全部流出,各组分完全分离,组分出峰顺序为:峰1为ASP,峰2为GLU,峰3为ASN,峰4为SER,峰5为GLN,峰6为THR,峰7为GLY,峰8为MET·SO2 ,峰9为HYP, 峰10为ALA,峰11为TYR,峰12为HIS,峰13为CYS(CH2),峰14为VAL,峰15为MET,峰16为PRO,峰17为TRP,峰18为LYS,峰19为PHE,峰20为ILE,峰21为LEU,峰22为ARG。

例8.氨基酸直接分析

样 品:12种未衍生氨基酸混合物溶液(1mMol/L)

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵

配有二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器和化学工作站

检测器:500型ELSD蒸发光散射检测器

漂移管温度为95℃,氮气流速2.5L/min

色谱柱:Alltima C18 , 5μm,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:A为含0.1% TFA的水

B为含0.1% TFA的乙腈

梯 度: 时间 0min 5min 20min

A液 100% 100% 60%

B液 0% 0% 40%

流 速:0.6mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在25min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为丝氨酸,峰2为赖氨酸,峰3为谷氨酸,峰4为精氨酸,峰5为脯氨酸,峰6为缬氨酸,峰7为甲硫氨酸,峰8为酪氨酸,峰9为异亮氨酸,峰10为亮氨酸,峰11为苯丙氨酸,峰12为组氨酸。



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